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Plk1 PBD蛋白文献资料
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Plk1PBD蛋白原核表达、分离纯化与活性鉴定
目的:原核表达保罗样激酶1底物结合域(Polo-like kinase 1 Polo-box domain,Plk1 PBD)蛋白,经分离纯化后进行生物学活性鉴定.方法:以HeLa eDNA为模板经PCR反应扩增Plk1 PBD基因,利用DNA重组技术与pET-28a载体连接构建重组质粒.将重组质粒转化到E.coli Rosetta(DE3),经诱导培养后进行Plk1 PBD蛋白原核表达.采用亲和层析方法分离纯化Plk1PBD蛋白后,以酶联免疫吸附测定实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和荧光偏振实验(fluorescence polarization,FP)进行生物学活性鉴定.结果:测序与重组质粒酶切结果表明,成功构建了pET-28a-Plk1 PBD原核表达质粒.SDS-PAGE电泳和Western blot实验证实了Plk1 PBD蛋白的原核表达.ELISA实验和FP实验表明Plk1 PBD蛋白具有良好的生物学活性.结论:成功进行了Plk1 PBD蛋白的原核表达、分离纯化与活性鉴定,为其生物学功能研究及以Plk1 PBD蛋白为靶标的新型抗肿瘤药物发现奠定了基础.
关键词： Plk1 PBD蛋白 原核表达 亲和层析 荧光偏振
