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自噬相关基因Atg12和LC3-Ⅱ在脑缺血再灌注大脑表达的实验研究
目的:探讨局灶性脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIR)时大脑皮质自噬相关蛋白-12(autophagy related protein-12,Atg12)和自噬微管相关蛋白轻链3抗体Ⅱ(autophagy microtubule-associated protein light chain 3 antibodyⅡ,LC3-Ⅱ)的激活规律,在此基础上探讨其对脑组织自噬的影响.方法:实验分为假手术组(sham组)和缺血再灌注组(CIR组),且CIR组下设CIR 0、6、12、24、48、72h共6个亚组.除sham组和CIR 24h组为每组20只外(其中10只用于模型鉴定),其余为每组10只.采用大脑中动脉栓塞术制备局灶性脑缺血再灌注模型,再灌注24 h后采用神经功能评分、2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色、脑组织含水量来鉴定脑缺血模型是否成功.采用免疫组化和免疫印迹方法检测大脑皮质Atg12和LC3-Ⅱ的表达规律.结果:与sham组比较,CIR 24h组可见明显的神经功能缺损、脑梗死和明显的脑水肿.免疫组化结果显示,Atg12和LC3-Ⅱ在大鼠脑缺血再灌注6h开始表达[阳性率分别为(15.49±4.18)％、(18.54±3.62)％],在24～48 h达高峰[(33.63±3.26)％、(29.62±1.73)％],72 h之后逐渐减弱[(24.90±3.96)％、(20.36±3.51)％].免疫印迹结果显示,Atg12和LC3-Ⅱ在大鼠脑缺血再灌注6h开始表达[表达量为(0.372 3±0.076 5)、(0.148 4±0.011 5)],在24～48 h达高峰[(0.741 7±0.071 8)、(0.451 3±0.019 0)],72 h之后逐渐减弱[(0.365 0±0.042 0)、(0.245 1 ±0.030 3)].结论:脑缺血时Atg12和LC3-Ⅱ在调节脑缺血的脑组织自噬方式中具有重要的作用.
关键词： 自噬 脑缺血再灌注 自噬相关蛋白-12 自噬微管相关蛋白轻链3抗体Ⅱ
