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最大反应速度文献资料
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不同方法测定黄嘌呤对Bacillus fastidiosus胞外尿酸酶抑制效力的比较
筛选酶抑制剂常需测定米氏常数(Km)和大反应速度(Vm)来确定抑制常数(Ki)[1,2].双倒数分析法测定Ki效率低,且靶酶Km越高则成本越高.积分法[3,4]和线性动力学法[5,6]测定Ki所需底物浓度都高于Km,至今对高Km靶酶都测定极低底物浓度下的半抑制浓度,或再换算成抑制常数表示抑制效力.但测定低浓度底物下的初速度要求高灵敏度的定量方法.实际上在低浓度底物下用简化积分法也可测定Ki[7].Bacillusfastidiosus胞外尿酸酶Km接近0.2 mmol/L,黄嘌呤是其竞争性抑制剂[4~6].本文用低浓度尿酸,比较测定初速度确定黄嘌呤半抑制浓度和简化积分法测定黄嘌呤抑制常数的差异.