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siRNA质粒载体文献资料
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insig-1基因siRNA干扰质粒的构建及对炎症状态下细胞胆固醇代谢的影响
目的 构建针对insig-1 基因的siRNA 表达载体,观察其对炎症状态下RAW264.7小鼠巨噬细胞胆固醇代谢的影响.方法 根据insig-1核苷酸序列,设计并构建针对insig-1 基因mRNA的3个特异性siRNA表达载体(si-1、si-2、si-3)和1个无同源性的阴性对照载体(si-nc),经酶切和测序鉴定确认 siRNA 载体构建成功后,转染RAW264.7小鼠巨噬细胞,RT-PCR、免疫组化法检测insig-1 基因的表达,筛选出佳抑制基因后,应用酶学方法 和油红O 染色观察炎症处理后RAW264.7细胞内胆固醇含量的变化.结果 经酶切证实,siRNA表达载体构建成功,RT-PCR、Western blot、免疫组化法显示与未转染组相比,si-1、si-2、si-3组RAW264.7细胞中insig-1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),其中si-2干扰效果强.酶学方法 和油红O 染色结果 表明,炎症状态下细胞insig-1沉默后胆固醇的含量和油红O 颗粒增多.结论 成功构建了insig-1基因 siRNA干扰质粒,insig-1缺失对炎症状态下细胞胆固醇摄取有促进作用.
