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ZnT8文献资料
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人锌转运体8强免疫原性片段的预测及原核表达鉴定
目的 筛选人锌转运体8(Zinc transporter 8,ZnT8)中强免疫原性片段,并对其进行克隆表达及鉴定.方法 采用生物信息学软件预测ZnT8结构特征,筛选出具有强免疫原性的N末端片段ZnT8(N),经PCR(Polymerase Chain Reaction)技术扩增,构建表达质粒pET32a-ZnT8(N),转化入E.coli BL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白的表达,并对表达产物进行SDS-PAGE分析及Western blot鉴定.结果 从ZnT8分子中筛选出具有140个氨基酸的肽段ZnT8(N),重组质粒pET32a-ZnT8(N)经酶切和测序鉴定证实构建成功.转入大肠杆菌进行表达,表达产物相对分子质量(Mr)约32 000,与预期值相符,并经免疫印迹检测鉴定为阳性,融合蛋白的表达量约占菌体蛋白总量45%.结论 筛选获得了人胰岛细胞来源的ZnT8强免疫原性片段,并在原核系统中成功表达.
