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esp1在A549和Hela细胞中的表达及对染色体倍性的影响
目的 观察esp1(estradiol-stimulated protein)在A549和Hela两种肿瘤细胞株中的表达与染色体倍性的关系.方法 提取肿瘤细胞A549、Hela及分别转染pIRE-S2-EGFP-ESPI的相应肿瘤细胞总RNA,逆转录,real-time quanti-tative PCR检测,比较esp1在肿瘤细胞中的表达变化;VIDEOTEST-KARYO 3.1分析相应的染色体数目变化;流式细胞仪检测其染色体倍性的改变.结果 转染pIRE-S2-EGFP-ESPl后espl表达上调(P＜0.01),染色体数目减少(P＜0.01),染色体倍性降低(P＜0.01).结论 esp1上调表达可以抑制肿瘤细胞异常分裂相,降低染色体倍性,但是esp1在A549和Hela两种肿瘤细胞株中的表达没有观察到明显差异.
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esp1基因上调表达对A549细胞凋亡影响的研究
目的观察A549细胞转染esp1基因后细胞凋亡情况.方法将含esp1 基因的IRE-EGFP 质粒用FuGENE 6 脂质体转染到肺腺癌细胞A549,经G418 筛选获得转染阳性的细胞系,检测转染细胞染色体数目及利用Annexin-V和TUNNEL 试剂盒检测细胞凋亡的变化.结果 A549细胞转入esp1基因后染色体异常分裂象减少,转染后细胞增殖减少,而去血清培养诱导的凋亡增加.结论 esp1的上调表达不仅对于肿瘤的异常染色体分裂象以及肿瘤细胞的异常增殖有一定的抑制作用,且对A549 细胞的凋亡有促进作用.
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PTTG ESP1在A549 SPC-A-1细胞株S G2/M期的表达
目的探讨PTTG(pituitary tumortransforming gene)、ESP1(estradiol-stimulated protein 1)在A549、SPC-A-1细胞S、G/M期的表达.方法用双胸苷同步化法同步化A549、SPC-A-1细胞及MRC-5细胞,分别收集S、G2/M期总RNA,做Realtime PCR.结果PTTG在A549细胞和SPC-A-1细胞的S期表达比G2/M期表达高,在MRC-5细胞的在S、G2/M期中P1TG均无表达;ESP1在A549细胞与SPC-A-1细胞及MRC-5细胞的S期表达均比G2/M期表达低.结论PTTG在MRC-5的S、G2/M期都无表达,在A549、SPC-A-1的S期比G2/M期表达增高,提示肿瘤细胞的染色体非整倍体与PTTG的表达增高有关;ESP1在MRC-5和A549、SPC-A-1的S期比G2/M期表达低,说明细胞中姐妹染色体的分离主要依靠于ESP1在G2/M期被激活,而导致姐妹染色体的分离.
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Separase上调对肿瘤细胞染色体分离作用的研究及条件表达载体的构建
目的研究esp1在肺腺癌细胞株spc细胞中对染色体分离的作用,为肿瘤的基因治疗探索新的方法.方法将已有的含esp1基因的EGFP-N1质粒转染spc细胞,检测其转染效率及对染色体分裂相的影响.同时构建能依赖四环素调控的含有esp1基因的pTRE-d2EGFP质粒载体.结果表达载体EGFP-N1-esp1转染成功,染色体异常分裂相减少.表达载体pTRE-d2EGFP-esp1构建成功.结论 esp1的上调表达对于肿瘤的异常染色体分裂相有一定的抑制作用,对于肿瘤治疗有潜在的应用价值.
