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miR-1322在低氧诱导动脉平滑肌细胞增殖中的作用及其机制
目的 研究miR-1322对低氧诱导人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cells,HPASMCs)增殖的调控作用并探讨其机制.方法 HPASMCs在1％ O2低氧中分别暴露0、6、12、24、48 h,利用RT-qPCR检测各个时间点miR-1322的表达,Western blot检测骨形成蛋白受体2(bone morphogenetic protein receptor 2,BMPR2)、p-smad1/5/9、p21的蛋白表达,CCK-8检测细胞增殖.将miR-1322抑制物(inhibitor)和阴性对照(negative control,NC)转染HPASMCs细胞24 h后再行低氧处理48 h,采用CCK-8检测12、24、48 h时细胞的增殖水平.利用双荧光素酶报告基因检测分析miR-1322是否绑定BMPR2 3'非编码区(untranslated regions,UTR).采用Western blot检测miR-1322对BMPR2蛋白的调控作用.转染BMPR2过表达质粒24 h后,再进行低氧处理48 h,采用CCK-8检测12、24、48 h时细胞的增殖水平,Western blot检测p-smad1/5/9和p21的蛋白表达.结果 HPASMCs低氧暴露12、24 h和48 h组miR-1322的表达均显著高于0h组(P＜0.05).miR-1322 inhibitor组miR-1322表达显著低于NC组(P＜0.05).miR-1322 inhibitor/低氧组在24、48 h时细胞增殖水平显著低于相同时间点的低氧组(P＜0.05).荧光素酶报告基因结果显示BMPR2是miR-1322的靶点.上调miR-1322的表达后,BMPR2蛋白表达较NC组有显著的下降(P＜0.05);相反地,抑制miR-1322后,BMPR2蛋白的表达显著高于NC组(P＜0.05).低氧6、12 h和24 h时,BMPR2和p21的蛋白表达较0h组显著降低(P＜0.05),而p-smad 1/5/9的蛋白表达显著升高.低氧下BMPR2过表达组p-smad1/5/9和p21的蛋白表达较空载体显著升高(P ＜0.05);CCK-8检测结果显示过表达BMPR2组的细胞增殖水平显著低于空载体组(P＜0.05).结论 低氧促进miR-1322在HPASMCs中的表达;上调miR-1322通过抑制BMPR2介导p-smad1/5/9-p21通路,促进细胞的增殖.
