您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
PCR重叠延伸技术文献资料
-
修饰GLP2分泌性表达载体的构建及促增殖活性测定的实验研究
目的 对胰高血糖素样肽-2(glucagon-like peptid-2, GLP-2)进行基因修饰,观察其促细胞增殖活性.方法 通过RT-PCR方法获得含GLP2编码序列的高血糖素原cDNA片段;通过PCR重叠延伸技术得到GLP2信号肽及成熟肽的嵌合分子,并将编码GLP2成熟肽N-末端第二位丙氨酸的序列(GCT)突变为编码甘氨酸的序列(GGT);将其插入真核表达质粒pVITRO3,转染至肠上皮细胞(Caco-2),观察其对细胞增殖活性的影响.结果 克隆的修饰GLP2基因与国外报道的核苷酸序列及其编码的氨基酸序列完全一致,并成功拼接GLP2的信号肽及成熟肽;且加入pVITRO3-GLP2-Caco-2培养上清的细胞生长明显快于对照组.结论 PCR重叠延伸技术适用于分泌性载体构建.构建的修饰GLP2表达系统所表达的蛋白具有促进肠上皮细胞增殖的作用.
-
HD-5分泌性表达载体构建
目的 构建防御素5分泌性表达载体.方法 通过PCR重叠延伸技术得到HD-5信号肽及成熟肽的嵌合分子,并将其插入真核表达质粒pVITRO3.结果 测序结果显示,成功拼接HD-5的信号肽及成熟肽,并插入到真核表达质粒pVITRO3,阅读框正确.结论 PCR重叠延伸技术适用于分泌性载体构建.
