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rPB-DR启动子文献资料
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含rPB-DR启动子和TK基因的重组腺病毒的构建和鉴定
目的构建含rPB-DR启动子和TK自杀基因的重组复制缺陷型腺病毒并进行鉴定,为前列腺癌基因治疗的研究奠定基础.方法应用分子克隆技术,将rPB-DR启动子连接至pBluescript SK-TK上构建出pBluescript SK-rPB-DR-TK,再酶切出rPB-DR-TK目的片断,并将其连接至穿梭质粒pShuttle上.将构建好的pShuttle-rPB-DR-TK经Pme Ⅰ单切线性化后再以电穿孔法转化至E.coli.BJ 5183-AdEasy-1内进行同源重组,抽提质粒经卡那抗性筛选及酶切鉴定正确的即为pAd-rPB-DR-TK,再经Pac Ⅰ酶切回收后以脂质体法转染人胚肾293细胞,包装出完整腺病毒,然后大量扩增测定滴度,并行PCR鉴定.结果经酶切、PCR及测序鉴定证实成功构建了包含rPB-DR启动子和TK自杀基因的重组复制缺陷型腺病毒pAd-rPB-DR-TK,包装、扩增后测病毒滴度为1.1×108 TCID50/ml.结论成功构建出包含rPB-DR启动子和TK自杀基因的重组复制缺陷型腺病毒并鉴定正确,可用于下一步前列腺癌基因治疗的研究中.
