首页 > 文献资料
-
人DeltaNp73α基因重组腺病毒载体的构建及其鉴定
目的 利用Adeasy腺病毒载体系统构建含人DeltaNp73α cDNA的重组腺病毒并在293细胞中扩增制备重组病毒.方法 从pcDNA3-DeltaNp73α-HA中酶切出DeltaNp73α基因,并插入pAdTrack-CMV中构建成腺病毒穿梭质粒;pAdTrack-CMV-DeltaNp73α线性化后电穿孔法转化到含有腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的E.coli.BJ5183菌株内同源重组.筛选正确的重组质粒,PacⅠ线性化后脂质体法转染293T细胞包装成重组病毒颗粒;并在293T细胞中反复扩增;增强离心法转染树突状细胞,Western blot检测目的蛋白的表达.结果 经限制性内切酶酶切鉴定、PCR筛选、基因测序和GFP表达证实成功构建了携带DeltaNp73α cDNA的重组腺病毒载体并制备出高滴度的重组病毒;Western blot检测出预期相对分子质量为67×103的特异条带.结论 成功构建了携带DeltaNp73α cDNA的重组病毒.
关键词： 重组腺病毒 DeltaNp73α -
人DeltaNp73α基因修饰的树突状细胞抗瘤免疫学效应研究
目的 研究DeltaNp73α重组腺病毒转染树突状细胞诱导的特异性免疫抗瘤作用.方法 人脐静脉血经梯度离心及IL-4、GM-CSF诱导培养树突状细胞;DeltaNp73α重组腺病毒增强离心法转染树突状细胞,观察DeltaNp73α对树突状细胞活化、凋亡的影响;同时检测其所诱导的DeltaNp73α特异性细胞毒性T淋巴细胞对不同DeltaNp73α表达水平肿瘤细胞的细胞毒性作用.结果 Western blot证实重组腺病毒转染树突状细胞后DeltaNp73α的有效表达;DeltaNp73α修饰的树突状细胞凋亡率显著低于对照组;DeltaNp73α修饰树突状细胞诱导的细胞毒性T细胞可以有效的杀伤DeltaNp73α高表达的A549/DeltaNp73α细胞、K-562细胞;且这种免疫抗瘤作用可能与靶肿瘤细胞DeltaNp73α水平相关.结论 DeltaNp73α修饰的树突状细胞,其凋亡率降低;并可以有效诱导针对DeltaNp73α高表达肿瘤细胞的特异免疫抗瘤作用.
关键词： DeltaNp73α 树突状细胞 重组腺病毒 免疫抗瘤 -
重组腺病毒载体介导人DeltaNp73α转染对树突状细胞凋亡的抑制作用
目的:研究人DeltaNp73α基因重组腺病毒转染人脐血来源树突状细胞(DC)对其成熟状态及其凋亡水平的影响.方法:用Adeasy系统构建人DeltaNp73α基因重组腺病毒;并通过增强离心法将其转染至人脐血来源DC;流式细胞仪分析转染后DC的成熟状态以及DC的凋亡水平.结果:成功构建了人DeltaNp73α基因重组腺病毒并高效转染DC;人DeltaNp73α基因重组腺病毒转染提高了DCCD83,HLA-DR的表达,并能显著抑制其凋亡水平.结论:人DeltaNp73α基因重组腺病毒转染DC,促进DC的成熟并抑制其凋亡,将有效地提高DC疫苗的抗原呈递能力.
