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肌动蛋白重构蛋白对瘢痕成纤维细胞增殖和分化的影响
目的 观察肌动蛋白重构蛋白(flightless Ⅰ,FliⅠ)对人瘢痕成纤维细胞增殖和分化的影响,探讨瘢痕组织形成的部分机制.方法 将实验分为空白组、Lipo2000组、Fli Ⅰ siRNA组、Fli Ⅰ cDNA组,采用WST-1法检测细胞增殖,RT-PCR法、Western blot法分别检测Fli Ⅰ、COL-1 mRNA及其蛋白的表达水平.结果 转染48 h后,各组成纤维细胞平均吸光度(A)值分别为:空白组0.934±0.153,Lipo2000组0.910±0.084,Fli Ⅰ siRNA组1.330±0.216,Fli Ⅰ cDNA组0.607±0.042,Fli Ⅰ siRNA组细胞增殖水平明显高于其他3组(P＜0.05);FliⅠ cDNA组细胞增殖水平明显低于其他3组(P＜0.05);RT-PCR法检测FliⅠ、COL-1 mRNA的表达:与空白组比较,FLi Ⅰ siRNA组扩增条带亮度减弱,FLi Ⅰ cDNA组扩增条带亮度明显增强,FLi ⅠsiRNA组的Fli Ⅰ与COL-1扩增产物条带相对灰度值较空白组分别降低至0.194±0.023和0.316±0.176,均显著低于其他3组(P＜0.01),而FLi Ⅰ cDNA组的Fli Ⅰ与COL-1扩增产物条带相对灰度值较空白组分别升高至7.846±1.075和9.842±1.659,均显著高于其他3组(P＜0.01);与空白组及Lipo2000组比较,FLiⅠ siRNA组的成纤维细胞中FliⅠ、COL-1蛋白表达显著减弱(P＜0.05,P＜0.01),FLi Ⅰ cDNA组细胞中Fli Ⅰ、COL-1蛋白表达显著增强(P＜0.05,P＜0.01).结论 FLi Ⅰ缺失能增强瘢痕成纤维细胞的增殖,并能在转录和翻译水平下调FLiⅠ与COL-1的表达,可能是瘢痕增生的机制之一.
