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沉默DNA-PKcs对肝癌耐药细胞Bel7402/5-Fu凋亡的影响
目的 研究DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)基因沉默后对肝癌耐药细胞Bel7402/5-Fu细胞凋亡的影响.方法 实验分为空白对照组、脂质体对照组、NC对照组、siDNA-PKcs实验组.采用噻唑蓝(MTT)法检测耐药细胞Bel7402/5-Fu的耐药性;采用阳离子脂质体法将siDNA-PKcs寡核苷酸片段转染Bel7402/5-Fu细胞;Real-time PCR和Western blot分别检测细胞DNA-PKcs mRNA及蛋白的表达情况;倒置荧光显微镜下观察细胞形态变化(Hoechst33342染色法);流式细胞术检测细胞凋亡情况(AnnexinV/PI双染法);Western blot检测B细胞淋巴瘤-2相关x蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-x基因长片段(Bcl-xl)蛋白的表达情况.结果 MTT检测Bel7402/5-Fu细胞的半抑制浓度(IC50)明显增高,耐药细胞Bel7402/5-Fu的耐药指旨数为13.13;DNA-PKcs的mRNA与蛋白表达水平明显减少,设计的siDNA-PKcs特异序列能有效沉默细胞DNA-PKcs的表达;Hoechst-33342染色检测结果显示siDNA-PKcs实验组细胞体积缩小、细胞核边集、呈亮蓝色;流式细胞术检测结果显示,siDNA-PKcs实验组细胞凋亡率比其余组增加(P＜0.01);Western blot检测结果显示siDNA-PKcs实验组Bax蛋白表达水平比其余组高,Bcl-xl蛋白表达水平比其余组低(P＜0.01).结论 siDNA-PKcs能诱导肝癌耐药细胞Bel7402/5-Fu细胞凋亡,并能上调促凋亡蛋白Bax的蛋白表达水平,抑制抗凋亡蛋白Bcl-xl的蛋白表达水平.
