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尿嘧啶DNA糖基化酶(UDC)文献资料
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脱氧尿嘧啶及尿嘧啶DNA糖基化酶抗PCR产物污染能力研究
目的 探讨脱氧尿嘧啶及尿嘧啶DNA糖基化酶抗PCR产物污染的能力.方法 用Taq-Man荧光定量PCR检测方法进行定量检测.将一系列不同浓度的含dUTP的HBVvDNA PCR扩增产物作为污染源,分别加至含dUTP/UDC的PCR反应体系和普通荧光定量PCR反应体系中,在荧光定量PCR仪上进行定量检测,从而得出含dUTP/UDC的PCR反应体系的抗污染能力.结果 佳抗污染实验条件:UDG酶含量0.05 U,消化时间37℃5 min,灭活时间92℃ 1 min;dUTP100%代替dTIP.含0.05 U的UDG抗污染反应体系对每管浓度为103拷贝/ml的污染物可完全消化,并随UDC含量的增高及消化时间的延长,抗污染能力增强.结论 dUTP/UDG反应体系的应用能有效防止PCR产物污染,但抗污染能力是有一定限度的,尚需加强实验室标准化管理,才能真正达到抗污染效果.
