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PD-1-Fc文献资料
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人PD-1-Fc融合分子的构建及其在CHO细胞中的表达与鉴定
目的利用基因工程手段构建hPD-1-Fc重组cDNA,用真核表达系统制备有活性的hPD-1-Fc融合蛋白.方法 PCR方法扩增编码hPD-1膜外区的cDNA序列,将其与人IgGlFc和pcDNA3.1(+)片段连接,构建成hPD-1-Fc重组表达载体.用脂质体法转染CHO细胞,夹心ELISA法检测上清液中融合蛋白hPD-1-Fc的表达,经Protein A亲合层析纯化,SDS-PAGE、免疫印迹鉴定表达产物.结果 PCR扩增得到编码人PD-1全长的288aa编码基因片段,将其膜外区167aa的编码序列与hIgG1Fc的cDNA片段一起连接并插入pcDNA3.1(+)表达质粒.重组质粒转染CHO细胞后,夹心ELISA法检测显示培养上清液中有hPD-1-Fc蛋白表达.纯化后的hPD-1-Fc蛋白经SDS-PAGE和免疫印迹鉴定其相对分子质量约42800,与理论预测值相符.结论成功构建了hPD-1-Fc重组表达载体,利用哺乳动物细胞CHO表达出有活性的hPD-1-Fc融合蛋白,为进一步研究PD-1分子在免疫耐受、自身免疫性疾病中的作用奠定了基础.
