首页 > 文献资料
-
制作疏松结缔组织教学铺片的探索
关于疏松结缔组织铺片的染色技术,近年来不少改进,能同时显示三种细胞两种纤维的方法也有几种,但是仍有不令人满意之处,比如巨噬细胞吞噬颗粒太少,显示不清楚,我们推测与甲醛液固定后水洗使其溶解有关,也可能与台盘蓝浓度有关.所以我们经过多次实验,作了如下探索和改进:①将来复红染色法中的1%台盘蓝注射液改为1.5%;②采用了10%、20%两种不同浓度甲醛固定液固定和95%酒精固定进行比较.结果20%甲醛效果较佳.具体操作如下:材料和方法:取250g重大鼠,腹腔注射台盘蓝,每天1针,共注射5针,第五针注射后两小时取材.腹腔注射麻醉剂,打开腹部皮肤,在腹股沟处取松结缔组织,铺于载玻片上,待干后分别固定于10%,20%甲醛溶液,或95%酒精内15～30min,甲醛固定组的用自来水洗后入来复红染液染色,酒精固定组不经水洗直接入来复红染液内染色.染色时间均为20～30min,经两次95%酒精分色1～2min,至镜下观察细胞和弹力纤维清楚为止,再用自来水洗,入偶氮卡红内染5min(60℃温箱内进行).95%酒清洗两次,按常规脱水透明封片.结果:95%酒精组清晰度差.甲醛固定的两组结构清晰,尤以 20%甲醛组巨噬细胞内蓝色颗粒保存较佳.弹力纤维棕红色,胶原纤维红色,巨噬细胞颗粒蓝色,肥大细胞颗粒紫红色.染液配制:一、来复红配法:来复红4g,间苯二酚4g、蒸馏水200ml混合后加热煮沸,加2%氯化铁溶液25ml,继续煮5min,冷却后过滤,将过滤物放于温箱内烤干,溶于200ml 95%酒精内,间接加温煮沸,待冷却后加4ml浓盐酸备用.二、偶氮卡红配法:偶氮卡红0.25g,蒸馏水100ml加热溶解后加冰蜡酸1ml备用.体会:固定液采用20%甲醛较好,它能避免台盘蓝在水洗过程中溶解,采用1.5%台盘蓝使巨噬细胞吞噬颗粒更多,显示更清楚.
