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内分泌及外分泌蛋白文献资料
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乳腺癌相关新基因EECP与IRES连接的EGFP基因双元表达载体的构建及初步功能研究
本研究目的在于构建含内分泌及外分泌蛋白(EECP)基因及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因非融合表达的真核表达载体,并转染乳腺癌细胞株MCF-7,检测EECP基因在真核细胞中的表达,初步研究EECP基因对细胞的生物学影响.EECP全长序列克隆至载体pBluescriptⅡSK(+)上,酶切连接至pIRES2-EGFP载体后转化大肠杆菌,筛选阳性克隆进行酶切电泳鉴定及测序鉴定.重组质粒转染MCF-7细胞,筛选细胞克隆MCF-7/MOCK及MCF-7/EECP,提取总蛋白确定EECP蛋白表达量变化.检测MCF-7/MOCK、MCF-7/EECP两组细胞增殖、细胞周期的变化.结果表明,重组质粒经酶切和测序证明构建正确,能有效转染乳腺癌细胞株MCF-7且EECP蛋白的表达量增加；MCF-7/EECP细胞较MCF 7/MOCK细胞增殖加快.结论:成功构建了乳腺癌相关新基因EECP与内部核糖体进入位点(IRES)连接的EGFP基因双元表达载体pEECP-IRES2 -EGFP,为进一步研究EECP基因的生物学功能奠定了基础.
