首页 > 文献资料
-
放射性碘标记特异性溶瘤重组腺病毒KH901在荷人肝癌裸鼠体内的抑瘤作用
研究~(131)I标记的特异性溶瘤重组腺病毒KH901的生物活性及~(131)I-KH901对荷人肝细胞肝癌裸鼠肿瘤的抑制作用.采用N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)法用~(131)I标记KH901,并采用ELISA法测定粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的生物活性;通过给药后荷人肝细胞肝癌裸鼠肿瘤的生长实验观察~(131)I-KH901对肿瘤生长的影响,组织切片观察肿瘤组织形态学变化.结果显示:~(131)I-KH901在肿瘤细胞中表达大量的GM-CSF因子,24 h后,在肿瘤细胞和正常细胞中产生的GM-CSF因子分别为183.27±6.90 pg/ml 和20.44±0.77 pg/ml ;肿瘤生长观察结果显示,~(131)I-KH901瘤内给药能明显抑制肿瘤生长,抑瘤率为71.3%,显著大于~(131)I组(22.7%)及KH901瘤内给药组(52.7%)(P＜0.05),组织形态学观察示,注射~(131)I-KH901后,肿瘤出现大片坏死区.因此,~(131)I-KH901能明显抑制裸鼠体内人肝癌细胞的生长,可望成为腺病毒溶瘤和放射性核素联合治疗肿瘤的新型药物.
-
特异性溶瘤重组腺病毒KH901的碘标记方法及其生物学分布
研究一种 125 I直接标记特异性溶瘤重组腺病毒KH901的简便高效的方法,以及评价 125 I-KH901的体内生物学行为.采用N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)方法对KH901进行标记,确定佳标记条件;用凝胶过滤层析法对标记物进行分离纯化,纸层析法测定放化纯度.对 125 I-KH901进行正常小鼠体内生物学分布检测.结果显示, 125 I-KH901的放化纯达到95%以上,标记率可达到78%;正常小鼠尾静脉注射 125 I-KH901后体内分布显示肝脏中放射性浓集度高,24 h检测肝脏仍有较多放射性滞留,可达13.34 %ID/g,标记物在肾脏的摄取也较高,为8.06% ID/g. 因此, N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)方法是一种步骤简便、标记率高的比较理想的碘标记病毒方法, 125 I-KH901主要分布在肝脏和肾脏.
-
特异性溶瘤重组腺病毒KH901对荷瘤鼠肿瘤生长的抑制作用和表达GM-CSF的研究
目的 探讨特异性溶瘤重组腺病毒KH901的抗肿瘤效果及表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的水平.方法 裸鼠皮下接种人肝细胞癌(Hep3B)细胞或人前列腺癌(LNcap)细胞,建立相应裸鼠移植瘤模型.KH901瘤体内注射给药,同时设阳性对照[5-氟尿嘧啶(5-FU)或顺铂尾静脉注射]和阴性对照[生理盐水(NS)尾静脉注射],以相对肿瘤增殖率(T/C%)和抑瘤率观察抗肿瘤效果;建立人肺癌 (A549) 裸鼠移植瘤模型,瘤体内注射KH901,分别于首次给药后第2、7、11、14、18、36d各取3只动物眶静脉采血并摘取肿瘤,以ELISA法测定血清和肿瘤匀浆液上清中GM-CSF含量.结果 ①在Hep3B裸鼠抑瘤实验中,KH901高剂量(3×1010 VP/鼠)组的T/C%和抑瘤率分别为7.31%、93.61%,与KH901低剂量(3×108 VP/鼠)组(40.27%、68.76%)和5-FU组(37.33%、61.49%)相比显示出较强的抑瘤效果(P＜0.05).②在LNcap裸鼠抑瘤实验中,KH901多次给药(3×1010 VP/鼠×3)组的T/C%和抑瘤率分别为5.47%、95.29%,其抑瘤效果强于顺铂组(25.47%、71.93%),但与KH901单次给药(3×1010 VP/鼠×1)组(12.94%、87.94%)相比差异无统计学意义.③在A549裸鼠移植瘤模型中,肿瘤和血清中的GM-CSF分别在第7d[(47.72±9.21) ng/mg]和第11d[(92.45±18.64) ng/mL]出现高峰,随后,GM-CSF表达量逐渐降低.结论 KH901有明显的抗肿瘤作用,在体内肿瘤中表达高水平的GM-CSF,并渗入血管到循环系统,形成血液GM-CSF的高峰.
-
特异性溶瘤重组腺病毒KH901的体外特异性抗肿瘤作用研究
目的 研究特异性溶瘤重组腺病毒KH901在体外培养的人肿瘤细胞中的选择性复制和杀伤作用.方法 以感染复数(MOI)=2 PPC的KH901和野生型腺病毒(Ad5)感染人肿瘤和正常细胞,72 h后采用病毒滴定法测定病毒滴度;以MOI＝10 PPC和1 PPC的KH901感染人肿瘤和正常细胞,24 h后通过ELISA法和TF-1依赖细胞株/MTT比色法测定粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的免疫活性和生物活性;以MOI分别为0、0.1、1、10、100、1000 PPC的KH901和野生型Ad5感染人肿瘤和正常细胞,采用MTT法测定各细胞活力,计算半数药物有效浓度(EC50).结果 野生型Ad5在正常细胞和肿瘤细胞中均大量复制,均表现出明显的杀伤作用;KH901在肿瘤细胞中大量复制[(2526.4±136.8)～(2796.6±104.6) TCID50/cell],表达大量的人GM-CSF[(1177.793±6.62)～(3924.497±17.79) IU/(106细胞·24 h)],并显示出明显的杀伤作用[EC50为(0.31±0.06)～(0.19±0.01) pfu/cell],在正常细胞中KH901复制较差[(56.8±9.2)～(90.1±14.4) TCID50/cell],只有少量的GM-CSF产生[(13.397±0.82) IU/(106细胞·24 h)],杀伤作用轻微[EC50为(92.33±9.12)～(121.20±19.94) pfu/cell],两者间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 KH901具有肿瘤选择性复制和杀伤作用,并能表达具有生物活性的GM-CSF,显示出治疗实质性肿瘤的潜力.
关键词： KH901 选择性肿瘤杀伤 选择性复制 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子
