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人胎盘血红蛋白文献资料
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人胎盘血红蛋白聚合工艺的优化研究
从影响血红蛋白与戊二醛聚合的相关因素戊二醛加样方式、血红蛋白浓度、戊二醛与血红蛋白摩尔比、反应时间和温度出发,以固定变量的方法逐个研究各因素对聚合产物分子量分布的影响,以达到降低制品平均分子量、提高有效转化率的目的.结果表明:原工艺平均分子量为(350.20±35.45) kD,有效转化率(分子量90 ～ 600kD)为53.27％±4.95％;而改进后工艺平均分子量为(158.60±8.70) kD,有效转化率为69.50％±3.70％.此外,改进后工艺应用于中试(扩大30倍)规模的验证性试验,有效转化率和平均分子量均可达到上述小试结果.
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应用超滤法对聚合血红蛋白分子量分级
目的 对聚合人胎盘血红蛋白(PolyPHb)作分子量分级以达到去除后小分子(≤64 kD)≤13％.方法 逐个分析影响超滤法超滤效果的超滤膜规格、PolyPHb浓度、超滤倍数等3个主要因素,以高效液相色谱(HPLC)检测超滤效果,选出三者较佳匹配条件后作扩试验制备出血红蛋白氧载体(HBOCs),超滤后HBOCs分别用血氧分析仪测定生物活性携/放氧功能P50和圆二色谱分析仪测定蛋白质二级结构等理化指标.结果 以结构、理化性质稳定、截留分子量合适、超滤效果较好为原则,确定超滤膜的规格为100 kD截留分子量膜堆、PolyPHb浓度为0.5％、超滤倍数8～10倍为较适组和扩试验所制得的PolyPHb分子量分布:寡聚体(≥600 kD)超大分子≤3％,小分子(≤64kD)≤13％.结论 选用合适的截留分子量膜堆、PolyPHb浓度、超滤倍数的超滤工艺能较好的将PolyPHb实现分子量分级,为大规模制备高纯度合格HBOCs奠定基础.
