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应用高分辨率熔解曲线快速诊断一例瓜氨酸血症1型患儿的ASS1基因纯合突变
目的 应用高分辨率熔解曲线(high resolution melting curve analysis,HRM)和DNA测序的方法对1例瓜氨酸血症1型患儿及其父母进行快速的基因诊断.方法 抽取患儿、患儿父母及100名正常体检者的外周血,采用HRM分析技术针对ASS1基因的16个外显子进行全外显子扫描,并对曲线异常的区域进行DNA测序.随后采用逆转录-PCR对ASS1基因的mRNA进行分析.后,采用PolyPhen-2和SIFT Blink软件分别对ASS1基因中的突变位点进行同源性和生物学功能分析.结果 血液生化检测结果显示患儿外周血中血氨达到286 μmol/L,超过正常参考值的5倍以上,串联质谱结果显示患儿外周血中瓜氨酸浓度高达487.69 μmol/L,CIT/ARG达148.66,均远高于正常范围.HRM的结果发现在ASS1基因第6外显子和第8外显子的区域(包含部分相邻内含子)中患儿及其父母的HRM曲线与正常对照不一致.DNA测序结果证实,在患儿第6外显子中发生了c.380G＞A的纯合突变,该突变会导致ASS1蛋白p.R127Q的改变.而在第8内含子中则发生了IVS8+60G＞A的纯合变异.患儿的父母中这两个位点均为杂合变异.100名正常对照样本中均未检出变异.逆转录-PCR结果表明ASS1基因第8内含子中IVS8+60G＞A的变异不会导致RNA剪接的异常.结构分析结果表明p.R127Q位点在45种脊椎动物中保守性非常高,它是ASS1蛋白中与瓜氨酸结合的位点,对于ASS1蛋白功能的行使非常重要.结论 在中国大陆人群中发现了ASS1基因第6外显子的c.380G＞A及第8内含子的IVS8+ 60G＞A复合纯合突变,其中c.380G＞A纯合突变可能是引起患儿尿素循环障碍的致病突变.
