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血友病甲基因分析技术的改进及其在产前诊断中的应用
目的 对血友病甲基因分析技术进行改进并应用于携带者检查和产前诊断.方法 长距离聚合酶链反应方法直接检测凝血因子Ⅷ第22内含子倒位,对非倒位家系用FⅧ基因内限制酶切位点XbaⅠ、HindⅢ、二核苷酸重复序列多态性位点STR13和STR22,以及基因外可变数目串联重复序列DXS52(St14)位点进行基因连锁分析.结果 52个家系共检出71位携带者.21个家系为第22内含子倒位,28个家系经连锁分析得到明确诊断,3个家系无法诊断,可诊断家系占94.2%.为18个家系做胎儿产前诊断,其中10例诊断为血友病甲胎儿;诊断7例正常男胎和1例携带者女胎,随访1年发育正常.结论 应用长距离聚合酶链反应和多位点基因连锁分析技术可以快速有效地进行血友病甲携带者检查和产前诊断.
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中国人甲状腺乳头状癌中RET/PTC融合基因DNA序列特征的初步研究
目的应用长距离PCR(long-distance PCR,LD-PCR),从甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)的基因组DNA中扩增RET/PFC 1、3融合内含子,并分析融合点附近的DNA序列特征,探讨中国成人散发性PTC中RET/PFC融合基因的发生机理.方法 20例新鲜PTC标本,用逆转录-PCR方法检测RET/PTC基因的mRNA表达,确定阳性病例及融合基因类型后利用长距离PCR扩增RET/PTC1和RET/PTC3的DNA片段.结果 20例PTC新鲜组织中检测到RET/PTC1和RET/PTC3阳性病例各1例:(1)RET/PTC1融合基因的DNA片段大小为3091bp,融合点位于H4基因的第1内含子和RET基因的第11内含子.融合点呈端端吻合,无缺失、插入及重复序列等改变.(2)RET/PTC3(ELE1-RET)和交互性融合(reciprocal fusion)后形成的相应DNA片段(RET-ELE1),大小分别为2119bp和1568bp.RET/PTC3的融合点位于ELE1基因第5内含子的Alu序列内,在ELE1基因融合点上游有polyA序列.ELE1-RET的融合点的两个碱基(gg)无法判断来源于RET或ELE1基因.结合RET/PTC3与RET-ELE1,在融合点ELE1基因有2个碱基(aa)缺失,RET基因有5个碱基(gttcc)缺失.结论 Alu序列可能参与了RET/PTC3融合基因的形成.对于研究PTC中RET/PTC融合点附近的DNA序列特征及融合形成的机制,长距离PCR是一种可行性比较高的研究方法.
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应用长距离PCR技术对60例重型血友病甲进行Ⅷ因子基因倒位的基因诊断
目的对天津60例重型血友病甲(hemophilia A, HA)患者作出有无FⅧ基因倒位的基因诊断.方法外周血提取DNA,通过长距离PCR(long distance-polymerase chain reaction, LD-PCR)扩增,0.6%琼脂糖凝胶电泳图谱诊断FⅧ基因倒位.只有11 kb条带者即为FⅧ基因倒位;只有12 kb条带者为野生型,即非倒位;出现11 kb、12 kb两条带者为该倒位携带者.结果被检测的60例患者中21例有FⅧ基因倒位,占35%.结论 LD-PCR技术可用于直接诊断FⅧ基因倒位,是重型血友病甲直接基因诊断的有效方法.
