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表皮葡萄球菌生物膜形成相关基因在表皮葡萄球菌和白假丝酵母菌混合生物膜形成中的作用研究
目的 探讨表皮葡萄球菌生物膜形成相关基因——胞间黏附素A(intercellular adhesionA,icaA)基因、纤维蛋白原结合蛋白(fibrinogen binding protein,fbe)基因、聚集相关蛋白(accumulation-associated protein,aap)基因在表皮葡萄球菌和白假丝酵母菌混合生物膜形成中的作用.方法 实验分为3组,用表皮葡萄球菌标准株ATCC35984(表葡组)及白假丝酵母菌标准株ATCC10231(白念组)分别培养及混合培养(混合组),建立表皮葡萄球菌、白假丝酵母菌及二者混合生长的体外生物膜模型.于培养2、4、6、8、12、24、48、72 h,采用结晶紫染色法半定量检测生物膜形成能力,二甲氧唑黄[(2,3 bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)5[(phenylamino) Carbonyl]2H-tetrazolium hydroxide assay,XTT]比色法评价生物膜体外生长动力学;24、72 h扫描电镜观察生物膜超微结构.荧光定量PCR分析培养72 h表葡组及混合组icaA、fbe、aap基因表达情况.结果 结晶紫染色法生物膜半定量检测示,混合组和表葡组均在培养12h生物膜明显增厚,72 h混合组超过表葡组,组间比较除72 h外,其余各时间点两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);白念组12 h出现生物膜的生长,在整个培养周期白念组生物膜厚度均低于混合组(P＜0.05).XTT比色法生长动力学检测示,混合组整体生长速度快于白念组,且48 h后超过表葡组;混合组与表葡组除12 h差异有统计学意义(P＜0.05)外,其余各时间点比较差异均无统计学意义(P＞0.05);混合组培养2、4h时A值低于白念组,但比较差异无统计学意义(P＞0.05); 6h后各时间点A值均显著高于白念组(P＜0.05).扫描电镜观察示,随培养时间延长各组均形成结构复杂、成熟的生物膜.培养72 h荧光定量PCR检测示,与表葡组相比,混合组fbe、icaA、aap基因表达量分别增高1.93、1.52、1.46倍,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 表皮葡萄球菌和白假丝酵母菌混合生长能形成比单一微生物结构更复杂的混合生物膜;混合生物膜较单一微生物生物膜更厚,可能与表皮葡萄球菌icaA、aap、fbe基因表达增加有关.
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聚集相关蛋白基因与转化生长因子β1对肺癌相关生物材料表皮葡萄球菌生物膜形成的影响
背景与目的研究聚集相关蛋白（accumulation-associated protein, Aap）基因及转化生长因子β1（TGF-β1）对肺癌相关生物材料表皮葡萄球菌（SE）生物膜形成的影响。方法种属鉴定分离临床肺癌患者植入材料感染表皮葡萄球菌株，PCR法检测生物膜形成相关基因Aap，检测表皮葡萄球菌Aap基因株生物形成能力。密度梯度法提取非小细胞肺癌患者外周血单个核细胞，与人肺腺癌细胞A549在不同浓度（10 ng/mL,20 ng/mL,40 ng/mL） TGF-β1共培养30 h后，取上清液分别加入SE Aap+株、SE Aap-株下与医用硅橡胶培养30 h，半定量粘附试验测各组细菌生物膜形成的情况，扫描电镜观察材料表面生物膜微观情况。结果 Aap基因的与表皮葡萄球菌生物膜的形成密切相关（P<0.01）。在（10 ng/mL,20 ng/mL,40 ng/mL）TGF-β1浓度组医用硅橡胶表面SE Aap+生物膜的厚度大于空白组（P<0.01）。SE Aap+株在TGF-β1浓度组间生物膜的厚度无明显差异（P>0.05）。在不同浓度TGF-β1因子刺激下SE Aap-株均不能形成明显细菌生物膜。结论在肺癌患者植入材料引起感染中表皮葡萄球菌Aap基因表达阳性株较易形成细菌生物膜，TGF-β1对SE Aap阳性形成细菌生物膜有一定促进作用。
