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雪旺细胞浆神经营养蛋白高效液相分离纯化及其生物活性研究
目的分离纯化雪旺细胞浆神经营养蛋白并研究其生物活性.方法取300只出生后1～3天SD大鼠双侧坐骨神经,纯化培养,收集雪旺细胞,超声粉碎,超速离心,不同孔径分子筛滤膜(PM10、30、50)超滤浓缩,收集分子量10～30 ku,30～50 ku和＞50 ku三种组份胞浆蛋白浓缩液,分别加入体外无血清培养的E14 SD胎鼠脊髓运动神经元培养液中,用MTT酶标法检测证实10～30 ku和＞50 ku两组份蛋白有神经营养活性.再通过Diol-150高效液相分子层析进一步从雪旺细胞胞浆中纯化分离出分子量为26 ku和58 ku两种胞浆蛋白,并对其神经生物活性进行研究.结果 26 ku和58 ku雪旺细胞胞浆蛋白能维持体外无血清培养的脊髓运动神经元存活,其佳生物活性浓度为20 ng/孔.结论雪旺细胞胞浆内含有分子量为26 ku和58 ku的运动神经营养蛋白.
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雪旺细胞胞浆神经营养蛋白促进周围神经再生的实验
目的研究雪旺细胞胞浆神经营养蛋白(SDNF)对周围神经再生的影响.方法选用90只成年SD大鼠,在右侧坐骨神经造成长10 mm缺损,用植入血管的变性骨骼肌桥接神经缺损.分成三组,每组30只.分别将分子量为26、58 ku的SDNF和生理盐水(对照组)于术中、术后7及14天注入肌桥的近段、中段和远段.术后均观察6个月.术后15天开始,每隔15天走足印一次,测定坐骨神经功能指数.术后1、3、6个月,每组取10只大鼠行神经电生理检测、比目鱼肌收缩力测定和组织形态学观察.结果分子量为26、58 ku的SDNF两实验组坐骨神经功能恢复指数、神经电生理、比目鱼肌收缩力和形态学观察指标,与对照组比较有非常显著性差异(P＜0.01).结论分子量为26和58 ku的SDNF有促进损伤的周围神经再生作用.
