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多效生长因子基因文献资料
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多效生长因子基因转染小鼠脂肪来源干细胞的实验研究
目的 探讨多效生长因子基因(pleiotrophin,Ptn)转染小鼠脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)作为组织工程血管的重建种子细胞的可行性,并检测其基因表达,为缺血性病损治疗提供新手段. 方法 取3只清洁级近交系C57BL/6W雌性小鼠(体重15～20 g)腹股沟皮下脂肪,采用酶消化法体外分离、培养ADSCs,流式细胞仪行细胞表面标志物CD29、CD44鉴定.实验分为转染pIRES2-LEGFPN1组(含Ptn基因编码序列,A组)和转染pLEGFP-N1负对照组(含GFP基因编码序列,B组).ADSCs转染后,A组以佳筛选浓度200 μg/mL的G418对转染后细胞进行筛选,流式细胞仪鉴定转染后细胞免疫表型.实时荧光定量PCR、Western blot检测A、B组细胞Ptn基因和PTN蛋白表达. 结果 实验成功分离、培养小鼠ADSCs;细胞表面标志物CD29、CD44阳性率分别达99.5％、95.8％,双阳性率达93.6％.A组转染Ptn后细胞表面标志物CD29、CD44阳性率分别达99.1％、95.6％,双阳性率达93.4％.实时荧光定量PCR、Western blot检测示,A组Ptn基因和PTN蛋白相对表达水平均显著高于B组(P＜0.05). 结论Ptn基因能转染小鼠ADSCs并高表达PTN蛋白,为组织工程血管构建种子细胞选择提供了新思路.
