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超顺磁性氧化铁标记文献资料
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经超顺磁性氧化铁标记的自体BMSCs在兔椎间盘内存活时间研究
目的 观察超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide,SPIO)标记的自体BMSCs在兔椎间盘内的存活时间,为后期采用转染成功的BMSCs预防椎间盘退变提供依据,并观察其迁移规律.方法 8～10周龄日本大耳白兔12只,雌雄不限,体重1.5～2.0 kg,取4 mL骨髓密度梯度离心法行BMSCs分离、培养.取第3代BMSCs (1×106个)用SPIO(25μg/mL)标记,普鲁士蓝铁染色检测标记效率,透射电镜观察标记细胞,锥虫蓝染色鉴定标记细胞活力,MTT法测定标记细胞及未标记细胞增殖,并绘制生长曲线.将12只兔随机分为实验组(N=8)和对照组(N=4),分别于L1、2、L2、3、L3、4、L4、5注入标记和未标记自体BMSCs悬液20μL(细胞浓度均为5×105个/mL),术后2、4、6、8周实验组和对照组分别取2只和1只动物处死,取相应椎间盘行普鲁士蓝铁染色观察细胞是否存活以及分布.结果 第3代BMSCs经SPIO标记后,普鲁士蓝铁染色标记效率为95.65%±1.06%;透射电镜观察示细胞质内有电子高密度铁颗粒:锥虫蓝染色示细胞活力为98.28%±0.85%;MTT检测显示7 d内未标记细胞组和标记细胞组间细胞增殖比较差异无统计学意义(P>0.05).实验组细胞移植术后8周,仍可观测到位于细胞质内的蓝染颗粒.对照组未见蓝染颗粒.结论 SPIO可以安全、有效地标记BMSCs,并能在体内持续存活8周.
