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胚胎面突外胚间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究
目的探讨人胚胎面突外胚间充质干细胞向成骨细胞分化的可能性. 方法将妊娠50天人胚胎面突外胚间充质干细胞,培养于含10 mmol/L β-甘油磷酸钠、100 μg/ml维生素C、10 nmol/L地塞米松?5%胎牛血清的DMEM矿化诱导液中.相差显微镜下观察细胞的形态变化,免疫组织化学检测Ⅰ型胶原的表达,碱性磷酸酶活性检测,矿化结节Von Kossa染色,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测骨钙素的表达. 结果诱导3天,细胞体积变大,由成纤维样变扁平,密集处细胞呈多边形、立方形,抗Ⅰ型胶原染色阳性,碱性磷酸酶活性增高;15天后有矿化结节形成; 25天Von Kossa染色阳性.RT-PCR显示诱导细胞表达成骨细胞特异的骨钙素. 结论人胚胎外胚间充质干细胞在体外能被诱导分化为成骨细胞.
关键词： 面突外胚间充质干细胞 成骨细胞 诱导分化 -
多种生长因子对胚胎面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化的诱导作用
目的: 探讨转化生长因子β1(TGFβ1)、牙本质非胶原蛋白(DNCP)、TGFβ1+DNCP、肝素+胰岛素样生长因子1(IGF-1)在诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化中的作用.方法:取妊娠12.5 d SD大鼠胎鼠颌突外胚间充质细胞(第4代),在转化生长因子β1(TGFβ1)(2 ng/mL)、牙本质非胶原蛋白(DNCP)(100 μg/mL)、TGFβ1(2 ng/mL)+DNCP(100 μ/mL)、肝素(1 μg/mL)+IGF-1(100 ng/mL)的诱导下,通过形态学观察、免疫组化、RT-PCR等方法,探索生长因子在外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化中的作用.结果:6 d后,在DNCP、TGFβ1+DNCP作用下,胎鼠面突外胚间充质细胞出现明显的形态改变,细胞由成纤维样变为梭形,部分核极化,有很长的突起,部分细胞呈现平行排列趋势.TGFβ1组部分细胞出现极化改变.DNCP、TGFg 1+DNCP诱导组抗牙本质涎蛋白(DSP)呈阳性反应,RT-PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白(DSPP),另外DMP1亦呈阳性表达.TGFβ1组不表达DSPP、DMP1.肝素+IGF-1组在细胞形态和蛋白、mRNA上均未出现成牙本质细胞特异的表达.结论:胎鼠面突外胚问充质细胞在DNCP和TGFβ1+DNCP的作用下能分化为成牙本质样细胞.表明在诱导中起关键作用的是DNCP.TGFβ1可诱导细胞在形态学上分化成类成牙本质细胞.本结果与该细胞在三维体系中的诱导分化结果相似,表明胚胎面突外胚间充质细胞在体外被诱导分化为成牙本质样细胞不是偶然现象,这为研究牙齿的分化和发育提供了良好的模型和实验依据.
关键词： 面突外胚间充质干细胞 成牙本质样细胞 生长因子 分化
