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核内定位文献资料
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Nm23-H1核内定位对人肺腺癌A549细胞增殖的影响
背景与目的 现有研究发现Nm23-H1还存在胞核表达,而既往的研究都是以过表达或抑制胞浆Nm23-H1为研究手段,由于Nm23-H1本身缺乏核引导序列,其研究结果并不能真实反映或重复临床中Nm23-H1以胞核定位为主的实际生物学效应.因此,本研究通过构建带有核引导序列的Nm23-H1载体并转染A549细胞以探讨Nm23-H1从胞浆向胞核转位对肺癌细胞增殖的影响.方法 采用基因重组技术构建带核定位信号序列的pLentis-CMV-NME 1-IRES2-PURO慢病毒载体,酶切和测序鉴定正确后,稳定转染A549细胞后用West-ern blot和激光共聚焦检测Nm23-H1蛋白的定位和表达,用CCK-8法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞周期变化.结果 成功构建了核内定向表达Nm23-H1的慢病毒载体.转染组在72 h、96 h和120 h时增殖率与空载体组相比均显著升高(P＜0.000,1).空载体组A549细胞在G0期/G1期所占比例为35.69％,高于转染组的28.28％(t=1.461,P=0.217);而转染组细胞在G2期/M期所占比例为58.7％,空载体组为31.30％(t=4.560,P=0.010).结论 Nm23-H1在人肺腺癌A549细胞的核内过表达使细胞主要分布在G2期/M期并促进了细胞的体外增殖.
