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人高、低转移大细胞肺癌细胞株双向凝胶电泳图像分析
背景与目的肺癌转移是肺癌的恶性标志和特征,也是肺癌患者治疗失败和死亡的主要原因.为了更好地了解和阐明肺癌转移的分子机制,发现早期诊断和逆转肺癌转移的分子标志物,本研究应用双向凝胶电泳技术,比较人高转移大细胞肺癌细胞株(L9981)和人低转移大细胞肺癌细胞株(NL9980)间蛋白质组表达的差异.方法利用固相pH梯度双向凝胶电泳,分离L9981和NL9980细胞株的总蛋白,用图像分析软件比较分析并识别细胞间的差异表达蛋白质.结果应用比较蛋白质组学技术对L9981和NL9980细胞株的蛋白质表达进行双向电泳分离,成功地获得了蛋白组分辨率高、重复性好的双向凝胶电泳图谱.在三次重复实验结果中,在L9981和NL9980细胞株中检测到的蛋白质点数分别为902±169和941±173,蛋白质斑点位置在IEF方向的平均偏差为(0.858±0.076)mm,在SDS-PAGE方向的平均偏差为(1.514±0.127)mm,蛋白质表达量的变异为12.06%～12.22%.经ImageMaster软件分析后发现有15个蛋白质点仅在L9981肺癌细胞株中检测到有表达,27个蛋白质点仅在NL9980中检测到有表达.发现4个蛋白质点在两种肺癌细胞株中均存在,但在两种细胞株间的表达量差异在2倍以上,其中3个蛋白质点在L9981中表达量显著高于NL9980,1个蛋白质点在NL9980中表达量显著高于L9981(P<0.05).结论本研究结果提示人高、低转移大细胞肺癌细胞株的蛋白质组表达存在明显差异,这些差异蛋白质有可能为进一步发现肺癌转移相关分子和阐明肺癌侵袭转移的分子机制提供实验证据.
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高转移和低转移人大细胞肺癌细胞株的比较蛋白组学研究
目的 探讨比较人高转移大细胞肺癌细胞株(L9981)和人低转移大细胞肺癌细胞株(NL9980))间蛋白质表达的差异.方法 采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离L9981细胞株和NL9980细胞株的总蛋白,用图像分析软件比较分析细胞间的差异表达蛋白质.对13个差异表达的蛋白质点通过胶内酶解,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALD-TOF-MS/MS)和蛋白质数据库检索进行鉴定.结果 经Image Master软件分析后发现有8个蛋白质点仅在L9981中检测到有表达,8个蛋白质点仅在NL9980中检测到有表达,发现19个蛋白质点在两种肺癌细胞株中均存在,其中9个蛋白质点在L9981中表达量显著高于NL9980,10个蛋白质点在NL9980中表达量显著高于L9981 (P<0.05).通过对差异明显的蛋白质点进行质谱鉴定和蛋白质数据库查询,发现线粒体热休克蛋白和谷胱甘肽合成酶在L9981中的表达被上调,P47蛋白、免疫球蛋白重链可变区、烯醇化酶1和真核翻译起始因子3 在L9981中的表达被下调, 丙酮酸激酶仅在L9981中有表达,WD-40重复蛋白仅在NL9980中有表达.结论 人高、低转移大细胞肺癌细胞株蛋白质组的表达存在明显差异, 鉴定的差异蛋白质多与肿瘤的侵袭转移相关,这些差异蛋白质有可能为进一步发现与肺癌转移相关的分子标志物和阐明肺癌转移的分子机制提供线索.
