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冷冻胚胎经序贯共培养用于建立人胚胎干细胞系
目的:利用长期冷冻人卵裂期胚胎经序贯共培养形成的囊胚建立人类胚胎干细胞系.方法:将冷冻≥10年的卵裂期胚胎复苏后,采用单层卵丘细胞序贯共培养至囊胚期,经辅助孵出,置鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层全胚培养,原代培养6d后加入20％ MEF条件培养基培养至形成原代克隆.观察人胚胎干细胞集落的生长状态并通过碱性磷酸酶染色、Oct-4基因表达、核型分析及体外分化实验等方法进行生物学鉴定.结果:9枚冷冻卵裂期胚胎经序贯共培养,有6枚发育到囊胚期,终获得1株胚胎干细胞系.经鉴定该细胞系具有碱性磷酸酶活性、表达Oct-4胚胎干细胞特异标记、形成拟胚体、在体外形成具有自动节律性的心肌细胞、并具有46,XY核型等5种特性.结论:冷冻胚胎经序贯共培养能够改善胚胎发育潜能,有助于建立人胚胎干细胞系.
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昆明鼠自体卵丘细胞与早期胚胎序贯共培养对胚胎体外发育潜能的影响
目的:评价昆明鼠胚胎与自体卵丘细胞序贯共培养对提高早期胚胎体外发育潜能的影响.方法:分两组进行实验,序贯共培养组使用分离培养的卵丘细胞与序贯培养液构建培养体系,与昆明鼠早期胚胎进行共培养;序贯培养组使用序贯培养液对早期胚胎进行序贯培养,观察两组胚胎各阶段囊胚形成率,检测囊胚总细胞数、囊胚细胞凋亡数,囊胚进一步培养获得的干细胞系数.结果:序贯共培养3d后总的囊胚形成率为68.13%,序贯培养组囊胚形成率为45.31%(P<0.05);囊胚总细胞数分别为76.52和38.57(P<0.05),细胞凋亡率分别为7.44%和16.28%(P<0.05).将囊胚进一步培养,共培养组干细胞建系率为12.50%,序贯培养组未能建系.结论:昆明鼠胚胎与自体卵丘细胞序贯共培养与序贯培养比较,前者能更好地模拟体内环境,提高早期胚胎体外发育潜能.
