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褪黑素对人卵裂期胚胎发育的影响及机制研究
目的 探讨褪黑素对人第3天(D3)卵裂期胚胎发育成囊胚的影响及其作用机制. 方法 收集2012年10月至2014年10月在本中心行IVF-ET助孕治疗患者捐赠的D3玻璃化冷冻胚胎,复苏后存活率100％且未发生卵裂球溶解的胚胎纳入研究(n=143),随机分为褪黑素组(培养液中加入1×10-7 mol/L褪黑素,n=71)和对照组(不添加褪黑素,n=72).两组胚胎均放于37℃、5％ CO2培养箱中培养72 h,统计囊胚及优质囊胚形成率;采用鲁米诺化学发光法检测培养液中总活性氧(ROS)水平;实时荧光定量PCR法分析抗氧化酶类基因CAT、GPx、SOD1、SOD2及凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达.结果 褪黑素组的囊胚形成率(42.25％)显著高于对照组(26.38％)(P＜0.05),优质囊胚形成率(30.00％)略高于对照组(26.32％),但无显著性差异(P＞0.05).培养72h后两组胚胎培养液中的ROS水平比较(513.33 vs.556.67 RLUs)无显著性差异(P＞0.05).褪黑素处理后,胚胎内过氧化氢酶基因CAT的相对表达量(1.68±0.43)较对照组(1.00±0.03)显著上调(P＜0.05),其他基因包括Bax、Bcl-2、SOD1、SOD2、GPx的表达则没有显著性差异(P＞0.05). 结论 褪黑素能够促进人卵裂期胚胎继续发育形成囊胚,其机制可能与上调胚胎中过氧化氢酶基因CAT的表达有关.
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冷冻胚胎经序贯共培养用于建立人胚胎干细胞系
目的:利用长期冷冻人卵裂期胚胎经序贯共培养形成的囊胚建立人类胚胎干细胞系.方法:将冷冻≥10年的卵裂期胚胎复苏后,采用单层卵丘细胞序贯共培养至囊胚期,经辅助孵出,置鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层全胚培养,原代培养6d后加入20％ MEF条件培养基培养至形成原代克隆.观察人胚胎干细胞集落的生长状态并通过碱性磷酸酶染色、Oct-4基因表达、核型分析及体外分化实验等方法进行生物学鉴定.结果:9枚冷冻卵裂期胚胎经序贯共培养,有6枚发育到囊胚期,终获得1株胚胎干细胞系.经鉴定该细胞系具有碱性磷酸酶活性、表达Oct-4胚胎干细胞特异标记、形成拟胚体、在体外形成具有自动节律性的心肌细胞、并具有46,XY核型等5种特性.结论:冷冻胚胎经序贯共培养能够改善胚胎发育潜能,有助于建立人胚胎干细胞系.
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不同载体用于人卵裂期胚胎玻璃化冷冻的初步研究
目的：比较不同载体用于人卵裂期胚胎玻璃化冷冻的效果。方法选择冰珠、自制叶片、冷冻环这三种载体，分别用于人卵裂期胚胎玻璃化冷冻后移植，比较不同组合的复苏率、临床妊娠率、植入率。结果冰珠组的复苏率、妊娠率、植入率为明显低于自制叶片组和冷冻环组，差异具有统计学意义(P<0.05)；自制叶片组和冷冻环组的复苏率、妊娠率、植入率差异无统计学意义(P>0.05)。结论冷冻载体选择自制叶片和冷冻环均可以取得较满意的冷冻效果，其中自制叶片的成本更低，所以应用自制叶片于人卵裂期胚胎玻璃化冷冻效果好且更经济。
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不同胚胎冷冻方法对冻融胚胎移植患者临床结局的影响
目的:比较人卵裂期胚胎玻璃化冷冻和慢速冷冻解冻后胚胎复苏率、卵裂球完整率、种植率以及临床妊娠率,评价两种方法的有效性.方法:选择2009年7月～2010年3月在辅助生殖中心行F-ET的89例患者,将其分为玻璃化冷冻组(46例)和慢速冷冻组(43例),比较解冻后胚胎复苏率、卵裂球完整率、种植率以及临床妊娠率.结果:玻璃化冷冻组与慢速冷冻组比较具有较高的胚胎复苏率(92.7%vs.66.1%)、卵裂球完整率(89.2%vs.61.4%)、种植率(21.1%vs.4.7%)以及临床妊娠率(47.8%vs.23.3%).结论:玻璃化冷冻法解冻后胚胎复苏率高,卵裂球完整性好,胚胎具有更好地发育潜能,是人卵裂期胚胎冷冻的有效方法.
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Cryotop玻璃化冷冻人类卵裂期胚胎的临床应用
目的 探讨玻璃化冷冻技术在人类卵裂期胚胎冷冻中的应用效果.方法 将接受体外受精-胚胎移植的患者第3天移植后剩余的胚胎进行Cryotop玻璃化冷冻保存,液氮下储存3个月后,根据患者情况复苏胚胎,观察胚胎复苏后的临床妊娠效果.结果 玻璃化冷冻复苏55个周期共172个胚胎,存活144个(83.7％).移植54个周期共133个胚胎,临床妊娠24个周期(44.4％).其中,3例流产(12.5％),5例足月分娩10个正常新生儿,19例继续妊娠.结论 Cryotop玻璃化冷冻法适于人类早期胚胎的冷冻保存,获得了理想的复苏率、妊娠率和种植率.
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人卵裂期胚胎玻璃化冷冻复苏后的体外培养时间对妊娠结局的影响
目的 分析人卵裂期胚胎玻璃化冷冻复苏后的体外培养时间对妊娠结局的影响.方法 对本中心2014年12月至2017年9月行FET(冻融胚胎移植)的患者984个周期进行回顾性分析,以移植时间为依据,分为两组,甲组解冻后次日移植(540个周期),乙组解冻当天移植(444个周期),以甲组胚胎生长情况为依据,将甲组分为两个亚组,甲1组所有胚胎均生长(342个周期),甲2组部分胚胎生长(198个周期).对各组胚胎着床率、临床妊娠率、胚胎复苏率、移植胚胎数、内膜厚度等进行对比分析.结果 甲、乙两组移植胚胎个数、内膜厚度、患者年龄比较,差异均无统计学意义(均P＞ 0.05);与乙组对比,甲组种植率、妊娠率有升高趋势,但差异均无统计学意义(均P＞ 0.05);甲1组胚胎着床率高于甲2组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 人卵裂期胚胎玻璃化冷冻复苏后的适当延长体外培养时间观察其发育潜能不会对妊娠结局产生不利影响,且延长培养时间后继续生长的胚胎具有更高着床率.
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封闭及开放载体在人卵裂期胚胎玻璃化冷冻中的应用比较
目的：比较封闭载体CBS和开放载体cryoleaf在人卵裂期胚胎玻璃化冷冻中的应用效果。方法：回顾性分析行CBS玻璃化冷冻复苏1115周期与同期行cryoleaf玻璃化冷冻488周期，比较两组胚胎复苏率、完整胚胎率、周期取消率、周期妊娠率、植入率、流产率、活产率及新生儿孕周、新生儿体重、早产率、出生缺陷率。结果：CBS 组与 cryoleaf 组胚胎复苏率、周期取消率比较差异无显著性（96．6％vs．96．0％，0．5％vs．1．2％）（P＜0．05）；CBS 组完整胚胎率低于 cryoleaf 组（93．0％ vs．95．0％，P ＜0．05）；CBS 组妊娠率、植入率、活产率均高于 cryoleaf 组（47．1％ vs．41．5％，30．6％ vs．24．0％，37．1％ vs．32．0％，P ＜0．05）；CBS 组与cryoleaf 组流产率、新生儿孕周、新生儿体重、早产率、出生缺陷率比较，差异无显著性（17．4％ vs．19．5％，37．8±2．7 vs．37．5±2．8，2976±697 vs．3028±782，19．2％vs．26．6％，0．9％vs．1．5％，P＞0．05）。结论：封闭载体CBS冷冻保存人卵裂期胚胎的效果优于开放载体cryoleaf ，对子代安全性无影响。
