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miR-128真核表达载体的构建及功能的初步研究
目的 构建miR-128真核表达载体,研究其在神经胶质瘤细胞株U343表达及对U343细胞增殖的影响.方法 以人神经胶质瘤细胞株U343的DNA为模板扩增miR-128-1和miR-128-2的前体序列,将人miR-128-1(has-miR128-1)和人miR-128-2(has-miR128-2)基因克隆到真核表达载体pCR3.1,将pCR3.1-miR-128-1(p-128-1)和pCR3.1-miR-128-2(p-128-2)表达载体瞬时转染U343细胞,采用Northern印迹检测成熟的miR-128表达.将U343细胞接种96孔板,MTT法检测过表达miR-128对细胞增殖的影响.结果 p-128-1和p-128-2表达载体经酶切及测序鉴定正确;二者转染细胞后,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增结果显示,其能有效表达miR-128的前体;Northern印迹结果均能产生成熟态的miR-128.MTT检测结果在无血清培养和维甲酸处理的情况下,细胞的增殖能力明显下降.结论 成功构建了p-128-1和p-128-2的真核表达载体,转染神经胶质瘤细胞后能有效表达,miR-128基因过表达能抑制U343细胞的增殖.
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脑胶质瘤患者血清miR-128和miR-720相对表达量及临床意义
目的 探讨血清miR-128和miR-720相对表达量对脑胶质瘤的诊断价值.方法 采用TaqMan MicroRNA Assays Real-time PCR技术检测62名健康对照者、54例低级别脑胶质瘤患者和57例高级别脑胶质瘤患者血清miR-128和miR-720相对表达量.结果 低级别脑胶质瘤组与健康对照组比较血清miR-720相对表达量差异有统计学意义(P＜0.05),高级别脑胶质瘤组miR-128和miR-720相对表达量差异均有统计学意义(P＜0.05)；与低级别脑胶质瘤组比较,高级别脑胶质瘤组的miR-128和miR-720相对表达量差异均有统计学意义(P＜0.05).miR-128和miR-720联合检测区分健康对照组和脑胶质瘤组的诊断灵敏性和特异性分别为92.3％和87.2％,区分低级别脑胶质瘤组和高级别脑胶质瘤组的诊断灵敏性和特异性分别为84.3％和88.9％.结论 血清miR-128和miR-720相对表达量联合诊断为临床脑胶质瘤的诊断和预后提供一种辅助方法.
关键词： 脑胶质瘤 血清 miR-128 miR-720 Real-time PCR技术 -
MiR-128对肺癌发生发展及血管和淋巴管生成的影响及机制研究
目的：：探讨miR-128对非小细胞肺癌发生发展及血管和淋巴管生成的影响及相关机制。方法：RT-PCR检测肿瘤组织及细胞miR-128的表达；应用慢病毒表达载体建立稳定表达miR-128的非小细胞肺癌细胞株；裸鼠移植瘤治疗实验证实ERK,AKT 和p38信号通路的磷酸化活性降低,进而阻断了上述信号通路。结果：miR-128在肺癌细胞株和非小细胞肺癌组织中表达下调,并且与非小细胞肺癌的分化程度、病理分期和淋巴结转移相关。异常的miR-128高表达可明显抑制肺癌细胞株的体外增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力,并且诱使细胞发生G1期细胞阻滞和凋亡发生。更重要的是,荧光素酶系统证实了miR-128与VEGF-C的靶向关系,miR-128的高表达促使了肿瘤细胞VEGF-C的表达下调和VEGF-C 3'UTR荧光素酶活性降低,导致了调控肿瘤血管和淋巴管生成的VEGF家族因子VEGF-A, VEGFR-2和VEGFR-3的表达下调,使得ERK,AKT 和p38信号通路的磷酸化活性降低,进而阻断了上述信号通路。而且裸鼠移植瘤治疗实验证实,体内恢复miR-128的高表达,可抑制肿瘤的体内生长及血管和淋巴管的生成。结论：miR-128在非小细胞肺癌的发生中起着重要作用,至少可以通过靶向调控VEGF-C表达来同时控制肿瘤的血管和淋巴管生成及相关信号通路,体内恢复miR-128的高表达有望成为非小细胞肺癌治疗的新策略。
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miR-128在胃癌中的表达及临床意义的研究
目的 研究miR-128在胃癌中的表达及临床意义.方法 采用原位杂交法检测112例胃癌组织及癌旁正常组织的表达,统计分析miR-128与胃癌患者临床参数的关系.结果 miR-128在胃癌中表达下调,在胃癌组织中阳性表达35例,阴性表达77例,而在癌旁正常组织中阳性表达89例,阴性表达23例;与患者的TNM分期相关,TNM Ⅰ～Ⅱ期患者中miR-128低表达的42例,高表达28例,TNM Ⅲ～Ⅳ期患者中miR-128低表达的35例,高表达的7例.结论 miR-128在胃癌组织中表达低于癌旁正常组织,与胃癌患者TNM分期,可作为胃癌分期预测的潜在分子标志物.
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125碘粒子植入联合肿瘤切除术治疗脑胶质瘤患者疗效及对血清miR-128、miR-29c表达的影响
目的 探究125碘粒子植入联合肿瘤切除术治疗脑胶质瘤的临床效果及对患者血清miR-128、miR-29c表达的影响.方法 选取2015年3月—2018年3月于郴州市第一人民医院神经外科接受治疗的脑胶质瘤患者80例,按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组各40例.对照组患者给予开颅肿瘤切除术,观察组患者在对照组的基础上给予125碘粒子植入治疗.荧光定量PCR法检测血清中miR-128和miR-29c表达水平,选用KPS功能状态评分对患者的功能状态进行衡量,比较2组患者的不良反应发生情况.结果 观察组患者治疗总有效率为95.00％,显著高于对照组的80.00％,差异具有统计学意义(χ2=4.114,P=0.043).肿瘤分化程度Ⅰ～Ⅱ级患者血清miR-128表达高于Ⅲ～Ⅳ级患者(χ2=3.643,P=0.000),miR-29c表达水平低于Ⅲ～Ⅳ级患者(χ2=3.934,P=0.000).治疗后,2组患者血清中miR-128水平均降低,miR-29c水平均升高,且观察组的变化明显优于对照组,差异有统计学意义(t/P=3.468/0.001,t/P=5.926/0.000).治疗后2组患者KPS评分均明显提高,且观察组患者的KPS评分显著高于对照组,差异具有统计学意义(t=8.519,P=0.000).观察组患者的不良反应发生率为5.00％,显著低于对照组的20.00％,差异有统计学意义(χ2=4.114,P=0.043).结论 采用125碘粒子植入联合肿瘤切除术治疗脑胶质瘤的效果明显优于单独采用肿瘤切除术,不仅可以改善患者血清中miR-128、miR-29c的表达水平,且不良反应发生率较低.
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miR-128对人黑素瘤细胞A375增殖和PTEN及p-Akt蛋白表达的影响
目的 研究miR-128对人皮肤黑素瘤细胞系A375的增殖能力和对PTEN及p-Akt蛋白表达的影响,探讨miR-128影响黑色素细胞增殖的机制.方法 将miR-128 mimics或inhibitor应用阳离子脂质体LipofectamineTM2000转染A375细胞,MTT检测转染后细胞增殖活力变化,Western blot方法检测PTEN及p-Akt蛋白表达.结果 转染miR-128 mimics后,A375细胞增殖活力明显增强,p-Akt蛋白表达明显上调,PTEN蛋白表达显著降低;转染miR-128 inhibitor后,A375细胞增殖活力明显降低,p-Akt蛋白表达明显下调,PTEN蛋白表达显著升高.结论 miR-128促进人黑素瘤细胞A375增殖可能与调控PTEN及p-Akt的表达相关.
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miR-128调控AK2蛋白的表达通过STAT3信号通路对宫颈癌细胞生物学行为的影响
目的:探讨miR-128调控AK2蛋白的表达通过STAT3信号通路对宫颈癌细胞生物学行为的影响其机制.方法:qPCR和Western blot检测宫颈癌组织和细胞中AK2和miR-128的表达情况;双荧光素酶实验检测miR-128和AK2之间的相互作用;CCK-8增殖试验检测miR-128对宫颈癌细胞增值能力的影响;裸鼠体内成瘤试验检测miR-128对宫颈癌细胞成瘤能力的影响;Western blot检测miR-128对STAT3信号通路蛋白水平的影响;Western blot检测过表达AK2蛋白逆转miR-128对p-STAT3的抑制水平.结果:在宫颈癌组织中AK2表达水平相比正常宫颈组织中高,miR-128在宫颈癌C33a细胞株中表达水平较低;双荧光素酶试验证实miR-128可以直接靶向调控AK2的表达;CCK-8增殖实验表明miR-128可以抑制宫颈癌细胞株的增殖能力;体内成瘤实验表明miR-128的增高可以抑制宫颈癌细胞成瘤能力[体积(3.05±0.35)cm3 vs(0.86±0.11)cm3,P=0.031;(3.26±0.39)g vs(0.89±0.15)g,P=0.016];Western blot实验表明miR-128可以抑制p-STAT的激活[(42.12±6.28)%vs(91.25±9.29)%,P<0.05],而AK2的过表达又可以逆转miR-128对p-STAT的抑制作用.结论:miR-128靶向调控AK2的表达进而通过STAT3通路的激活调控宫颈癌细胞的生物学行为.
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miR-128在原发性肝癌组织中的表达及临床意义
目的：本文旨在探讨miR-128在原发性肝癌组织中的表达及临床意义。方法收集原发性肝癌患者手术切除标本65例，癌旁正常组织作为对照，运用原位杂交技术检测肝癌组织及对照正常肝组织中miR-128的表达水平，分析其与患者临床参数的关系。结果在65例肝癌组织中miR-128阳性表达率为24．6％（16/65例），对照组阳性表达率为66．1％（43/65例），差异有统计学意义，并且miR-128的表达随着肝癌患者临床分期进展而降低。结论 miR-128可能成为肝癌患者病情进展预测的潜在生物学标志。
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microRNA-128：肿瘤治疗新靶点?
微小RNA（ miRNA）是体内一类长度为21～25个核苷酸的内源性非编码单链RNA，其主要通过完全或不完全互补结合至靶基因的3’非编码区而调控靶基因的表达。 miRNA有多种类型，其中miR128在多种疾病和正常组织中均不同程度的表达，具有广泛的调节作用。研究发现miR128参与了神经胶质瘤、白血病、胃癌、肺癌及乳腺癌的发生过程，对细胞的分化、增殖、迁移和凋亡有重要作用。本文就miR128在肿瘤中的研究进行详细阐述，以期为肿瘤的治疗提供新的靶点。
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汉黄芩素调节恶性胶质瘤U87细胞增殖和凋亡并影响miR-128的表达
目的:观察汉黄芩素(wogonin)对人胶质瘤细胞株U87增殖和凋亡的影响,并初步研究miR-128在汉黄芩素影响U87细胞系中的作用机制.方法:汉黄芩素(浓度分别为25、50和100 μmol/L)作用于U87细胞24 h和48 h后,分别用荧光显微镜观察U87细胞形态,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡.并采用qRT-PCR检测U87细胞中miR-128的表达.结果:汉黄芩素处理24 h和48 h后,U87细胞数量明显减少,细胞核固缩或裂解；MTT检测结果显示U87细胞的增殖受到汉黄芩素的抑制并且与药物的作用时间和剂量有关；流式细胞术检测显示汉黄芩素处理后的细胞其大量停留在S期,汉黄芩素作用胶质瘤细胞24h后活细胞比率下降,细胞死亡率增加.汉黄芩素处理后的U87细胞中miR-128的表达量较对照组明显增高.结论:汉黄芩素能抑制U87细胞的增殖,促进其凋亡,其机制与miR-128的上调可能有密切的相关性.
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miR-128抑制结肠癌侵袭转移的机制研究
目的 分析miR-128在结肠癌细胞中的表达情况,研究其对结肠癌细胞生物学行为的影响及作用机制.方法 对转染miR-128模拟物后的结肠癌SW48细胞进行培养,采用MTT法行细胞增殖实验检测细胞增殖能力,细胞划痕法检测细胞迁移能力,Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力;并采用RT-RCR检测miR-128 mRNA的表达,Western blot法检测miR-128蛋白的表达.结果 转染miR-128模拟物后的结肠癌SW48细胞较转染空白对照模拟物后的,细胞增殖、侵袭及迁移能力均下降(均P＜0.05),且转录因子Sp1基因在mRNA及蛋白水平均下降(均P＜0.05).结论 miR-128可抑制结肠癌细胞增殖及侵袭转移,可能通过调控Sp1基因发挥上述作用.
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循环miR-128在结直肠癌患者血清中的表达及其对细胞迁移侵袭能力的影响
目的 检测循环miR-128在结直肠癌患者血清中的表达,观察其对结直肠癌细胞迁移侵袭能力的影响.方法 选择2012年6月至12月在山东大学齐鲁医院行结直肠癌根治术的结直肠癌患者57例(结直肠癌组,又分为转移组和未转移组),以健康查体的志愿者20例(健康对照组)为参照.实时荧光定量PCR法检测两组血清中miR-128的表达,分析其与结直肠癌转移的关系;采用Lipofectamine 2000将miR-128模拟物转染入HT-29细胞,观察miR-128过表达对HT-29细胞迁移侵袭能力的影响.结果 结直肠癌组血清miR-128水平明显低于健康对照组(P ＜0.001),其中转移组水平明显低于未转移组(P =0.014).ROC曲线分析显示,血清miR-128对诊断结直肠癌和转移鉴别诊断的效能分别为0.85、0.71(P均＜0.05).miR-128过表达使HT-29细胞迁移愈合率以及迁移、侵袭细胞数明显减少.结论 循环miR-128在结直肠癌患者血清中表达明显下调,并且与转移密切相关,为结直肠癌转移诊断和治疗提供了新思路.
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膀胱癌中miR-128与血管内皮生长因子C的靶向调控关系
目的 研究人膀胱尿路上皮癌细胞和组织中的miR-128与血管内皮生长因子C(WGF-C)的靶向调控关系及其生物学功能.方法 收集9对配对的膀胱癌组织和其癌旁组织,1株人正常尿路上皮细胞(SV-HUC-1)和4株膀胱癌细胞(T24、5637、UM-UC-3和RT4),通过RT-PCR、Western Blot方法检测VEGF-C和miR-128的表达水平;将miR-128复合物或miR-128抑制剂等复合物转染到2株膀胱癌T24和5637细胞中,检测miR-128对其生长、迁移及侵袭的影响;生物信息学软件预测分析miR-128的靶基因,双荧光素酶实验验证miR-128是否靶向作用VEGF-C.结果 相比癌旁组织和正常尿路上皮细胞,膀胱癌组织和细胞中miR-128的表达明显下调(P＜0.05),而VEGF-C在癌组织和细胞中都呈现高表达(P＜0.05).miR-128可抑制膀胱癌细胞生长、克隆形成及迁移侵袭(P＜0.05).双萤光素酶报告实验证实miR-128靶向作用VEGF-C(P ＜0.05).结论 miR-128在膀胱癌中表达下调,而VEGF-C表达上调;miR-128可通过靶向调控VEGF-C影响膀胱癌细胞的增殖和转移.
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miR-128在乳腺癌血清中的表达量
目的：探讨miR-128在乳腺癌患者血清中表达量及其潜在的意义。方法采用实时荧光定量PCR技术检测miR-128在87例乳腺癌患者和25例正常人血清中的表达量。结果与正常对照组相比，miR-128在乳腺癌患者血清中显著低表达（=0.003），且miR-128的表达量与乳腺癌患者化疗敏感性相关。结论乳腺癌血清中miR-128表达下调，miR-128的表达与乳腺癌的化疗敏感性密切相关，miR-128可能是临床评价乳腺癌化疗敏感性的重要指标。
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miR-128通过RECK靶向作用影响乳腺癌细胞的生物学行为
目的 探讨miR-128通过RECK靶向作用影响乳腺癌细胞的生物学行为及其作用机制.方法 Western blot检测miR-128在细胞株中的表达情况及慢病毒转染效率;流式细胞术检测miR-128对乳腺癌细胞凋亡行为的影响;双荧光素酶实验检测miR-128和RECK在乳腺癌细胞中的相互作用;流式细胞术实验检测RECK对miR-128在乳腺癌细胞周期和集落形成过程中的逆转作用.结果 MCF-7细胞中miR-128的表达量是NC组细胞的3.05倍,慢病毒转染效率明显;miR-128通过诱导细胞凋亡和抑制细胞周期进程来抑制MCF-7细胞的生长;RECK是miR-128的直接靶基因,miR-128可以直接调控RECK的表达活性;RECK异位恢复时,miR-128对乳腺癌细胞的凋亡和细胞周期的抑制也得到了部分恢复.结论 miR-128在乳腺癌的发生发展过程中起重要作用,可以和RECK相互影响调控乳腺癌细胞的生物学行为,提示miR-128和RECK可能成为乳腺癌的潜在治疗靶标.
