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机械牵张力促进小鼠骨髓间充质干细胞的成骨向分化
目的 旨在研究p38分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号通路和转录因子Osterix在间断性机械牵张力刺激下促进小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)成骨向分化的作用机制.方法 将C57BL/6J小鼠BMSC分为空白对照组、牵张力组和牵张力阻断组(p38MAPK通路抑制剂SB203580+牵张力),采用Flexercell体外细胞力学加载装置,施加频率为0.5 Hz、形变率为0.8%的牵张力,每天2次,每次30 min,分别在实验第1、3、5d收获BMSC.实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测成骨基因ALP、COLⅠ、OCN的mRNA水平变化情况,Western blot检测P-p38-MAPK蛋白的表达情况.通过小干扰核糖核酸(siRNA)技术沉默小鼠BMSC的osterix基因,Westem blot检测Osterix蛋白的表达情况,RT-PCR检测成骨相关基因ALP、COLⅠ、OCN的mRNA水平变化情况.结果 牵张力作用后,可观察到成骨相关基因ALP、COLⅠ、OCN及转录因子Osterix的mRNA水平增高.沉默osterix后,小鼠BMSC成骨相关基因ALP、COLⅠ、OCN的mRNA水平也随之降低.Western blot结果显示,牵张力组小鼠BMSC中Osterix和P-p38-MAPK的蛋白质水平明显高于对照组(P<0.05).SB203580作用后,小鼠BMSC成骨相关基因ALP、COLⅠ、OCN和osterix的mRNA水平降低.结论 间断性牵张力可通过活化p38MAPK-Osterix通路促进小鼠BMSC成骨分化.
关键词: 间断性牵张力 骨髓间充质干细胞 成骨向分化 p38MAPK信号通路