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PPE25蛋白在分枝杆菌感染中性粒细胞中的作用
目的 研究PPE25蛋白在耻垢分枝杆菌(M.smegmatis,MS)感染中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophil,PMN)时所起的作用.方法 利用异源表达结核分枝杆菌(M.tuberculosis,Mtb) PPE25蛋白的重组MS(MS-ppe25组)感染人PMN,以空载体MS(MS-vec组)为对照菌,观察2种MS的菌落形成、单菌落大小、生长曲线,以了解PPE25蛋白对MS生长的影响;PMN感染MS后,以菌落形成单位(colony forming unit,CFU)计数了解细菌活力的变化;检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放百分比,以观察重组MS对PMN死亡的影响,流式细胞仪检测活性氧(reactive oxygen species,ROS),硝酸还原酶法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)水平,ELISA检测细胞因子白细胞介素(IL)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的变化,分析PPE25蛋白在MS感染PMN中的作用.结果 PPE25蛋白对MS生长、菌落形成及单菌落大小无影响;MS感染PMN 2、6、12 h,MS-ppe25组CFU、LDH释放百分比均高于MS-vec组,两组LDH释放百分比差异有统计学意义(P＜0.05);MS感染PMN细胞后2h,MS-vec组ROS、NO水平较MS-ppe25组高(P＜0.01);MS-ppe25组PMN细胞表达的TNF-α各时点均高于对照组(P＜0.01),IL-1β在MS感染6h后均高于对照组(P＜0.01).结论 PPE25蛋白能增加MS在PMN内的生存、诱导细胞坏死、抑制ROS和NO的表达,改变细胞因子的分泌,有利于病原体的播散及逃避宿主免疫.
