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重组质粒pGEX-Sj14-3-3文献资料
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日本血吸虫重组质粒pGEX-Sj14-3-3的构建及其在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达
目的 构建并研究日本血吸虫重组质粒pGEX-Sj14-3-3在大肠埃希菌BL21 (DE3)中的表达.方法 从日本血吸虫成虫组织提取总RNA;RT-PCR扩增Sj14-3-3编码基因；将此基因克隆至载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-Sj14-3-3；转化人DE3中,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达；表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.结果 RT-PCR扩增出399 bp的Sj14-3-3编码基因；并成功将其插入pGEX-1λT构建了重组质粒pGEX-Sj14-3-3；SDP-PAGE显示相对分子质量约为40 000的重组蛋白,与预期结果相符,薄层扫描分析显示表达蛋白约占菌体总蛋白的21％;Western blot显示重组蛋白可被日本血吸虫感染兔血清识别.结论 日本血吸虫重组质粒pGEX-Sj14-3-3构建成功,重组质粒在大肠埃希菌BL21中可较高效表达,且表达蛋白具有特异的抗原性.
关键词： 日本血吸虫 重组质粒pGEX-Sj14-3-3 构建 大肠埃希菌 表达
