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基于TRAIL受体热稳定的亲和性定量检测
目的 基于肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)受体的热稳定性建立其在肿瘤中定量检测的新途径.方法 检测胰腺癌细胞AsPC-1和Capan-2内源碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)的活性和变性温度.利用AP标记的TRAIL (AP-TRAIL)分别孵育转膜后的死亡受体5(death receptor 5,DR5)融合蛋白(DR5-AP)和经100℃沸水蒸煮去除内源AP活性的胰腺癌细胞系AsPC-1和Capan-2,再与AP的底物Reagent S和Reagent A进行颜色反应,进行细胞受体定量检测和细胞原位受体结合试验.结果 胰腺癌细胞系AsPC-1和Capan-2的内源AP在65℃水浴下不能完全失活,阻碍了对TRAIL受体的检测,在沸水蒸煮后其AP活性显著下降,而DR5-AP在沸水中具有热稳定性.AP-TRAIL能够识别并结合高温蒸煮后的胰腺癌细胞AsPC-1和Capan-2表面的受体,AP-TRAIL孵育的读数为2.210±0.393和2.027±0.019.结论 TRAIL受体具有热稳定的性质,它的发现能够为更好的肿瘤诊断、预测及个性化治疗提供新方法.
