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水动力法尾静脉注射文献资料
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Sleeping Beauty转座子介导敲低PEX2转基因载体的构建
目的 借助Sleeping Beauty(SB)转座系统在小鼠肝脏中稳定过表达原癌基因MYC诱导小鼠肝癌形成,并在SB转座子pT3EF1α-c-Myc基础上构建可在小鼠体内敲低PEX2的重组转基因载体.方法 借助水动力法尾静脉注射(Hydrodynamic tail vein injection,HTVI)和SB转座子系统向小鼠肝脏导入携带目的基因MYC的转座子质粒,诱导小鼠肝癌形成.以载体为模板,分别扩增U6-shNC、U6-shPEX2序列,通过T4连接获得目标载体pT3EF1α-c-Myc-shNC、pT3 EF1α-c-Myc-shPEX2.结果 ①实验组小鼠成功诱导出肝癌.②经酶切和测序等方法鉴定,构建质粒完全正确.③细胞瞬时转染实验质粒pT3 EF1α-c-Myc-shPEX2及其对照质粒pT3EF1α-c-Myc-shNC,确定在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中实验组质粒可以降低PEX2的mRNA水平.结论 借助HTVI技术和SB转座系统过表达c-Myc成功诱导小鼠肝癌形成,并在SB转座子质粒pT3EF1a-c-Myc基础上构建了可在小鼠肝癌细胞Hepal-6中敲低PEX2基因的重组转基因载体.
