您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
GPC6基因文献资料
-
GPC6基因RNA干扰病毒载体的构建及在鼻咽癌传代细胞株中的表达
目的 构建磷脂酰基醇蛋白聚糖-6(glypican-6,GPC6)的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,转染人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞,鉴定沉默效应.方法 设计GPC6基因特异性RNA干扰靶序列,与经A-gel和EcorI酶切后的GV115载体连接,产生重组慢病毒质粒GV115,筛选阳性克隆,测序鉴定,与慢病毒包装载体共转染293T细胞,荧光/绝对定量(qPCR)法测定滴度.慢病毒感染鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞,RT-PCR检测靶基因的沉默效率.结果 双酶切鉴定GPC6基因干扰病毒载体,证实短发夹RNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入序列正确,293T细胞包装慢病毒后,其GPC6基因慢病毒载体的病毒滴度为2.0×108 TU/mL,干扰效率为80％.shRNA干扰鼻咽癌CNE-2Z细胞GPC6基因后,RT-PCR、结果显示感染后GPC6基因的mRNA水平显著下降,证明重组慢病毒对CNE-2Z细胞中GPC6基因有明显敲减作用.结论 成功构建针对鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞株的GPC6基因RNA干扰慢病毒载体,并获得GPC6基因稳定干扰的鼻咽癌细胞株,为进一步研究GPC6基因在鼻咽癌发生过程中的作用奠定基础.
