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赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)文献资料
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敲低赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)促进人诱导性多能干细胞分化为产胰岛素细胞
目的 探索一种人诱导性多能干细胞(hiPSC)体外高效分化为产胰岛素细胞(IPC)的诱导方案.方法 RNAi技术敲低hiPSC赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)基因后,利用四步法诱导其体外分化为IPC.流式细胞术分析IPC分化效率,实时定量PCR检测细胞LSD1、POU5同源盒转录因子1(OCT4)、Y染色体性别决定区因子17 (SOX17)、叉头盒蛋白A2(FOXA2)、胰腺和十二指肠同源盒蛋白1(PDX1)、配对盒转录因子4(PAX4)、PAX6、肝细胞核因子6(HNF6)、肝细胞核因子1同源盒蛋白A(TCF1)、NK6同源盒蛋白1(NKX6.1)、葡萄糖转运子2(GLUT2)、葡萄糖激酶(GK)、胰岛素及MAF bZIP转录因子A(MAFA)的mRNA水平,免疫荧光技术检测细胞PDX1、胰岛素的表达和定位;双硫腙(DTZ)染色和透射电镜分别观察细胞内胰岛素的分泌和分泌颗粒分布情况;ELISA检测诱导后细胞胰岛素和C肽分泌量.结果 LSD1敲低组的IPC分化效率较对照组有明显提高,胰岛β细胞发育相关基因SOX17、PDX1、PAX4、胰岛素的mRNA表达显著上调.LSD1敲低组的IPC共表达成熟β细胞特异性蛋白PDX1和胰岛素.另外,这些IPC能感应葡萄糖刺激并以胰岛素分泌小泡形式释放胰岛素,胰岛素或C肽释放量约为天然胰岛细胞的1/6(而对照组仅为1/8).结论 敲低LSD1基因可以促进hiPSC体外高效分化为IPC.
