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四环素操纵子(Tet-on)可诱导系统文献资料
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细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白2A(CDKN2A/p16INK4a)在MCF7细胞中的可诱导表达并引起F-actin的重分布
目的 使用四环素操纵子(Tet-on)可控表达系统研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白2A(CDKN2A/p16INK4a)对MCF7乳腺癌细胞形态及细胞骨架的影响.方法 以p16INK4a表达缺失的MCF7乳腺癌细胞为宿主细胞,用慢病毒通过“两步感染法”建立MCF7-pTet-on-p16INK4a可诱导表达细胞系,加入诱导剂强力霉素(Dox)诱导目的基因表达;细胞计数检测细胞生长变化;采用免疫细胞化学染色检测上皮钙黏素(E-cadherin)表达,采用鬼笔环肽(phalloidin)标记纤维型肌动蛋白(F-actin),观察p16INK4a对细胞间黏附连接、细胞骨架的影响;用显微镜对细胞拍照后,用Image J软件进行形态分析.结果 成功建立了可诱导表达p16INK4a的MCF7稳定细胞系,Dox可以有效诱导p16INK4a的表达;诱导条件下稳定表达p16INK4a的MCF7细胞增殖受抑制,细胞体积增大,轮廓线延长;而对照MCF7细胞F-actin主要定位于胞质,p16INK4a表达的细胞内F-actin向细胞边缘分布增加.结论 p16INK4a在MCF7细胞中的表达可以导致细胞体积增大、细胞间黏附连接弱化、F-actin向细胞外周重新分布.
