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caspase募集结构域膜相关鸟苷酸激酶蛋白1(CARMA1)文献资料
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慢病毒介导的CARMA1稳定沉默抑制K562细胞的侵袭和转移能力
目的 研究RNAi技术稳定沉默caspase募集结构域膜相关鸟苷酸激酶蛋白1(CARMA1)基因后对K562细胞增殖、克隆形成和侵袭转移的影响.方法 应用慢病毒介导的RNAi技术构建稳定沉默CARMA1基因的K562细胞,反转录PCR和Western blot法分别检测CARMA1 mRNA和蛋白的抑制情况.应用台盼蓝拒染法分析细胞增殖情况,克隆形成实验观察细胞克隆形成,TranswellTM实验(含Matrigel或不含Matrgel)检测体外迁移与侵袭能力的改变.反转录PCR和Western blot技术分析相关信号通路分子的改变,并探讨可能机制.结果 成功构建6株细胞株:其中1株为阴性对照(K562/sh-eGFP),另5株为CARMA1基因沉默的细胞株.K562/shCARMA 1-93对CARMA1的抑制效果好,利用该模型进行后续研究.台盼蓝拒染法和克隆形成实验表明,K562/shCARMA 1-93的生长和克隆形成能力受到明显抑制(P＜0.01).与空白对照K562和阴性对照K562/sh-eGFP相比,细胞生长抑制率分别为29.3％和28.6％;克隆形成抑制率分别为37.6％和34.1％.体外迁移和侵袭转移实验证实,与对照组相比,K562/shCARMA1-93穿膜细胞数明显减少,有统计学差异(P＜0.01).CARMA1受抑制后,信号通路分子核转录因子-κB(NF-κB)及早期生长反应基因1(EGR1)的表达也随之下降.结论 CARMA1的稳定沉默会抑制K562细胞的增殖、克隆形成和侵袭转移,这可能与NF-κB、JNK/EGR-1信号通路受抑制有关.
