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志贺毒素1型A亚基文献资料
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肠出血性大肠杆菌O157∶H7志贺毒素Ⅰ型A亚基的表达与鉴定
目的 表达肠出血性大肠杆菌(EHEC) O157∶H7志贺毒素1型A亚基(Stx1A)重组蛋白并鉴定.方法 从EHECO157∶H7基因组中扩增编码Stx1A的基因,经测序无误后,克隆入表达载体pET-22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导、纯化获得目的蛋白Stx1A,并对纯化的目的蛋白进行质谱鉴定.重组的Stx1A蛋白免疫BALB/c小鼠,观察小鼠抗血清与EHECO157∶H7毒株特异性反应.结果 PCR扩增的Stx1A基因为945 bp,成功构建重组质粒pET22b(+)-Stx1a,重组蛋白在原核细胞中获得高效表达,通过AKTATM-His亲和层析柱获得纯化.质谱分析表明目的蛋白为Stx1A.Western blot显示鼠抗Stx1A血清可与EHEC O157∶H7毒株产生的天然毒素蛋白结合.结论 成功克隆了EHEC O157∶H7 Stx1A基因,并获得重组表达,为后续研究奠定基础.
关键词： 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 志贺毒素1型A亚基 鉴定
