首页 > 文献资料
-
真核表达载体p4ARE-TK-GFP/Neo的构建及其表达
目的:构建真核表达载体p4ARE-TK-GFP/Neo, 并在HepG2细胞中进行表达.方法:PCR法扩增TK启动子克隆到pEGFP-N1上, 构建表达载体pTK-GFP/Neo.人工合成4个ARE序列, 经退火和磷酸化后插入pTK-GFP/Neo载体的TK启动子上游, 构建由TK启动子启动以及上游有4个ARE调控的真核表达载体p4ARE-TK-GFP/Neo, 将其转染入HepG2细胞株并筛选, 进行稳定表达.结果:成功构建了真核表达载体p4ARE-TK-GFP/Neo, 并建立HepG2细胞稳定表达株.结论:成功地构建了由TK启动子启动以及上游有4个抗氧化反应元件(ARE)重复序列调控的真核表达载体p4ARE-TK-GFP/Neo, 并在HepG2细胞中稳定表达, 为下一步研究ARE的调控作用奠定了基础.
-
4ARE强化的双荧光蛋白报告基因载体的构建及鉴定
目的:构建4ARE强化的红、绿双荧光蛋白报告基因载体.方法:人工合成3对ARE序列,经退火和磷酸化后插入pARE-TK-GFP载体,构建成p4ARE-TK-GFP载体.以质粒pDsRed2-N1为模板,PCR扩增红色荧光蛋白及其启动子序列与pMD18-T载体连接,构建成pMD-DsRed载体.用Ade I酶和BspT I酶对载体pMD-DsRed和p4ARE-TK-GFP进行双酶切,连接产物转化大肠埃希菌DH5α 感受态细胞后,挑取阳性克隆子进行质粒抽提酶切及测序鉴定.结果:经酶切及DNA测序证实,目的片段ARE及DsRed的序列完全正确,重组双荧光蛋白报告基因载体成功转入DH5α.结论:成功构建4ARE强化的双荧光蛋白报告基因载体并在DH5α内表达,为进一步研究ARE的调控作用奠定了基础.
关键词： 抗氧化反应元件(ARE) 双荧光蛋白 报告基因 载体构建 -
Nrf2信号通路及其分子调控机制
核因子Nrf2信号通路是目前发现的抵御外源性刺激和毒物的抗氧化应答反应的核心转录因子.胞质抑制蛋白Keap1、多种蛋白激酶介导的磷酸化、以及新近认识的胞核抑制因子Bach1等均参与Nrf2信号通路的调控.对该通路的调控很可能与多种生理功能、病理改变、疾病以及癌症等密切关联.
关键词： Nrf2 氧化应激 抗氧化反应元件(ARE)
