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预先形成的重链二硫键有助于HLA-A2-抗原肽复合物体外折叠
目的: 提高可溶性HLA-A2-肽复合物体外折叠效率.方法: 在变性非还原条件下提取原核表达的HLA重链(HC).通过离子交换及硫酸铵沉淀初步纯化后, 在β2微球蛋白(β2m)及特异性抗原肽(Try369-377)存在的情况下, 于pH 6.6 的折叠缓冲体系中稀释复性.利用Western blot及ELISA检测折叠产物.结果: 折叠复合物中主要含有HLA-A2-抗原肽复合物和β2m, 较少含有HC聚合体; 折叠效率较传统方法提高2.5倍.结论: 通过与传统方法作比较, 证实此法折叠效率比传统方法高, 为进一步HLA-肽四聚体及人工抗原提呈细胞的制备可提供足够可溶性的HLA-A2-肽单体.
关键词： HLA-A2-抗原肽复合物 体外折叠 二硫键形成 -
可溶性HLA-A2-肽复合物的体外折叠与生物素化
目的: 可溶性HLA-A2-抗原肽复合物的体外折叠复性与生物素化.方法: 原核高效表达的HLA H链及β2m, 在抗原肽(EB病毒的膜潜伏蛋白LMP2A的NH2-CLGGLLTMV-COOH残基)的存在下, 通过稀释复性折叠成HLA-A2-抗原肽复合物, 并在BirA酶的作用下进行生物素化, 使生物素结合到HLA-A2-抗原肽复合物中的H链C端.利用特异性抗体 (mAb W6/32和兔抗人β2m抗体)及链霉亲合素进行ELISA和Western blot, 检测稀释复性和生物素化的折叠产物. 结果: 折叠复合物中, 主要含有HLA H链聚合体、HLA-A2-肽复合物单体及β2m 3种成分, 其中H链聚合体与HLA-A2单体可生物素化.结论: 成功地获得生物素化的HLA-A2-抗原肽复合物单体, 为进一步构建四聚体及制备人工抗原提呈细胞奠定了基础, 也为过程复杂的HLA-抗原肽四聚体的制备提供了可行的免疫学监控方法.
关键词： HLA-A2-抗原肽复合物 生物素化 BirA酶
