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重组蛋白MOMP文献资料
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嗜肺军团菌重组MOMP蛋白间接ELISA方法的建立及其在血清学诊断中的应用
目的 表达及纯化出嗜肺军团菌主要外膜蛋白(MOMP)作为诊断抗原,研究其在嗜肺军团菌感染血清学诊断中的实用价值.方法 将已成功构建的重组质粒pET-momp转化到大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞中,诱导重组MOMP表达,运用SDS-PAGE和亲和层析法纯化.用DRG军团菌IgG、IgM、IgA的ELISA试剂盒筛选出58份阳性血清和32份阴性血清,用纯化的MOMP蛋白作为诊断抗原建立间接ELISA,同时与R&D公司军团菌的IgG、IgM、IgA ELISA试剂盒分别检测已筛选血清中的IgG、IgM、IgA抗体,然后用受试者工作特征(ROC)曲线对这2种方法进行比较,通过敏感性、特异性以及检测结果的一致性,来评价重组MOMP间接ELISA的应用价值.结果 成功诱导表达并纯化出相对分子质量(Mr)大约为45 000的重组MOMP蛋白.重组MOMP建立的间接ELISA分别检测筛选血清中IgG、IgM、IgA抗体与R&D公司的ELISA试剂盒进行比较,IgG抗体灵敏度90.9％,特异度91.7％,一致性Kappa值0.784(P ＜0.05),ROC曲线下的面积0.913; IgM抗体灵敏度91.4％,特异度90.6％,一致性Kappa值0.809(P ＜0.05),ROC曲线下的面积为0.910; IgA抗体灵敏度92.1％,特异度88.9％,一致性Kappa值0.793(P ＜0.05),ROC曲线下的面积0.905.结论 成功诱导表达及纯化出重组MOMP蛋白,将其作为诊断抗原所建立的间接ELISA表现出了较好的特异性,灵敏度和一致性,为军团病的血清学诊断试剂盒的研制奠定了基础.
