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免疫抑制位点文献资料
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缺失免疫抑制位点的人早孕因子重组蛋白的免疫原性
目的:构建缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因的原核表达载体pGEX6P-EPF11,诱导GST-EPF11融合蛋白在大肠杆菌中表达,并免疫小鼠,测定效价.方法:以pMD18T-HSPE1模板,PCR扩增缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因片段,经限制性内切酶BamH I和Xho I双酶切后,连接到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达质粒pGEX6P-EPF11.将表达质粒转化大肠杆菌BL21,以1 mmol/L IPTG 进行诱导表达GST-EPF11融合蛋白,Western blot鉴定.以表达的GST-EPF11融合蛋白作为免疫原免疫小鼠,抗体效价用ELISA检测.结果:在大肠杆菌中成功表达出相对分子质量约35 000的融合蛋白GST-EPF11.ELISA法检测免疫小鼠的抗体血清可达1:12 800.结论:在大肠杆菌中成功表达出GST-EPF11融合蛋白,并免疫了小鼠,测定了抗体效价,为下步制备缺失免疫抑制位点的人早孕因子的单克隆抗体(mAb)奠定了基础.
