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重组原核表达载体文献资料
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HBV/HEV融合二价抗原原核表达载体的构建及蛋白的初步表达
目的:构建一个能够表达出乙/戊型肝炎二价抗原的重组原核表达载体,并在E. coli BL21(DE3)中表达.方法:采用PCR方法扩增出HBV的S基因和HEV的ORF2编码区的羧基末端中的414～606 aa的基因片段,将两片段连接后克隆入T载体,得到融合基因,将融合基因克隆入含有Ω增强子的pTΩ-TE高效的原核表达载体中,构建重组质粒pTΩ-TTSE.将pTΩ-T7SE转化E. coli BL21(DE3),经IPTG诱导后用Western blot鉴定融合蛋白.结果:获得全长为1 284 bp的融合的HBV/HEV的基因片段.已构建的重组质粒pTΩ-T7SE转化E.coli BL21(DE3)后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量(Mr)约为50 000重组蛋白.SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于胞质中,表达量约占全菌蛋白的30.52%.Western blot结果表明在Mr为50 000处可见特异性着色带.结论:成功构建了原核表达载体pTΩ-T7SE,并表达出目的蛋白,为研制预防乙型和戊型肝炎双价疫苗提供了实验技术基础.
