您当前的位置:
首页 > 文献资料
所属专业:
重组人白细胞介素 - 7文献资料
-
人白介素-7重组蛋白的原核表达、纯化及活性测定
目的:构建重组质粒 pET32a - hIL -7,诱导表达,纯化并鉴定目的蛋白。方法:将人白介素-7基因克隆到原核表达载体 pET32a(+)上,得到重组质粒 pET32a - hIL -7,转化大肠杆菌 BL21(DE3),经 IPTG 诱导得到融合蛋白 Trx - hIL -7。融合蛋白主要以包涵体形式存在。包涵体通过复性、酶切、纯化等步骤处理。利用 Western blot 鉴定重组蛋白,对其生物学活性用其依赖性细胞株2E8增殖实验测定。结果:成功构建重组质粒 pET32a - hIL -7。包涵体通过透析复性,肠激酶切,镍柱纯化等步骤得到重组蛋白人 IL -7。纯化的重组蛋白经 Western blot 鉴定能与抗人的 IL -7抗体特异性结合。经体外细胞实验检测证明,纯化的重组蛋白具有生物学活性。结论:得到了有活性的重组蛋白 IL -7,为研究其功能奠定了基础。
关键词: 重组人白细胞介素 - 7 原核表达 生物活性