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FP1文献资料
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大鼠ferroportin1过表达慢病毒载体构建及其转染PC12细胞
目的:构建含大鼠ferroportin 1(FP1,膜铁转运蛋白1)基因和EGFP(绿色荧光蛋白)基因的过表达慢病毒载体并转染PC12细胞.方法:化学合成含有目的基因FP1的质粒,将酶切获得的目的基因连接人线性化慢病毒载体,构建重组质粒PGC-FU-FP1并进行测序鉴定；鉴定正确的阳性克隆采用Lipofectamine2000转染293T细胞,通过荧光显微镜和Western Blot检测FP1表达情况；在脂质体介导下将PGC-FU-FP1、pHelper1.0和pHelper2.0三质粒系统共转染入293T细胞,包装产生慢病毒,并通过实时荧光定量PCR法检测病毒滴度.以重组慢病毒载体质粒PGC-FU-FP1转染PC12细胞,荧光显微镜下观察EGFP的表达,实时荧光定量PCR和Western Blot法分别检测FP1mRNA和蛋白表达情况.结果:FP1基因序列经测序后与GeneBank报道的序列完全一致；重组质粒PGC-FU-FP1中携带有正确的FP1基因并能在293T细胞中表达；病毒滴度为2×108 TU/ml.荧光显微镜、实时荧光定量PCR和Western Blot法证实目的基因FP1能被重组慢病毒高效导入PC12细胞并得到过表达.结论:成功构建携带FP1基因的慢病毒载体,并获得FP1基因修饰的PC12基因工程细胞.为进一步研究FP1在帕金森病中的作用及基因治疗奠定基础.
