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VMAT2 RNA探针 基因表达 帕金森病文献资料
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人VMAT2基因RNA探针制备及其在COS-7细胞中的表达
本研究目的在于制备人Ⅱ型囊泡单胺转运体(VMAT2)基因的反义和正义RNA探针,以检测VMAT2基因能否在真核细胞表达.从携带pGEM-Easy-T-VMAT2克隆载体中通过限制性酶切反应得到VMAT2基因,与pBK-RSV载体重组构建真核表达载体pBK-RSV-VMAT2;分别以T7和T3聚合酶制备反义和正义探针,通过斑点杂交检测探针浓度.转染猴肾成纤维细胞COS-7,原位杂交及免疫荧光细胞化学检测VMAT2的表达.结果证明,反义和正义探针浓度分别为80ng/μl及120 ng/μl;原位杂交及免疫组织化学证实重组的真核表达载体pBK-RSV-VMAT2在COS-7的表达阳性率为(10.6±1.2)%.本研究结果表明获得VMAT2基因反义链及正义链RNA探针,并检测到VMAT2基因在真核细胞中表达.
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