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USPIO标记大鼠骨髓源神经干细胞体外磁共振成像研究
目的 应用磁共振成像技术(MRI)观察超小超顺磁性氧化铁(USPIO)欣诺(Sinerem)标记后的大鼠骨髓源神经干细胞体外成像情况.方法 分离大鼠骨髓基质干细胞,体外培养诱导成神经干细胞.以200μg/ml的浓度105个细胞用不同的自旋回波序列T1WI、T2WI与T2*WI在2％的琼脂糖凝胶中模拟在体环境分别行4.7T扫描确定佳的扫描序列.将不同浓度(0、25、50、100、200、500μg/ml)Sinerem和干细胞共孵育培养过夜标记后置于2％的琼脂糖凝胶中,以自旋回波序列T2*WI磁共振干细胞成像;并在磁共振下观察不同数量细胞200 μg/ml Sinerem标记细胞(101个,102个,103个,104个,105个)的信号情况.观察细胞在浓度200 μg/ml(106个)标记时经长期培养不同时间点时的信号变化.结果 MRI扫描结果提示序列T2*WI扫描的敏感性强.不同浓度的Sinerem标记细胞的磁共振信号强度不同,随着Sinerem浓度的升高MRI信号呈降低趋势,浓度为500 μg/ml时信号强度低,肉眼观察可看到浓度100 μg/ml以上标记细胞的MRI的信号强度明显低于对照样品,可进行区分.标记细胞数量达103个及以上时在磁共振下其信号变化能被观察到.106个标记细胞的信号随培养时间的延长逐渐增加,4w时仍能在磁共振下显示可区分的低信号.结论 利用Sinerem标记的骨髓源神经干细胞体外可在MRI下呈现可视区别的低信号影,T2*WI序列是敏感的序列;信号强度的高低可用于评估标记细胞的数量.Sinerem标记的细胞可用于磁其振下讲行长期的示踪.
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Sinerem标记大鼠骨髓基质细胞及移植后活体示踪研究
目的 初步探索利用欣诺(Sinerem)和转染试剂体外磁性标记大鼠骨髓基质细胞这一方法的可行性,为将来临床上应用MRI追踪标记细胞奠定基础.方法 无菌条件下行股骨取骨髓,梯度密度离心法分离获取大鼠骨髓基质细胞,使用 Sinerem-多聚赖氨酸复合物(SE-PLL)标记骨髓基质细胞,采用普鲁士兰染色、电镜和台盼蓝排除实验等方法鉴定SE-PLL标记大鼠骨髓基质细胞的效率和细胞的活力,并对SE-PLL标记骨髓基质细胞的增殖和分化能力进行评估.将SE-PLL标记和未标记后的骨髓基质细胞分别移植入大鼠左右侧尾壳核脑内,细胞移植后1、4、7 w应用MRI对脑内移植的细胞进行活体示踪,后利用组织切片进行普鲁士兰染色.结果 Sinerem可以高效率地标记骨髓基质细胞,标记效率在99%左右.普鲁士蓝染色显示SE-PLL标记骨髓基质细胞胞质内出现细小的蓝色铁颗粒.电镜结果显示SE-PLL标记的骨髓基质细胞胞质内含有许多包裹铁颗粒的囊泡.与正常未标记的细胞相比较,SE-PLL标记对骨髓基质细胞的活力、增殖和分化等能力没有明显的影响.MRI检查发现脑内移植的标记细胞在磁共振上呈明显的低信号改变,未标记细胞侧脑组织无明显的低信号改变,与组织学切片结果基本一致.结论 以上结果提示Sinerem可以用来体外标记骨髓基质细胞,利用MRI技术可以对脑内移植后的标记细胞进行初步的活体追踪.
