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Alphastatin文献资料
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肿瘤血管抑制肽alphastatin基因克隆及序列分析
目的 克隆获得编码具有生物学活性的肿瘤血管抑制肽alphastatin基因.方法 采用非对称引物/模板法,依据基因库提供的alphastatin基因序列,设计合成alphastatin基因的引物/模板链,利用聚合酶链反应(PCR)法,从DNA中扩增出人肿瘤血管抑制肽alphastatin基因片段;将获得的基因片段插入质粒载体pGEM-T Easy中,转化到大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆,利用限制性内切酶酶切鉴定重组质粒.结果 经质粒DNA酶切分析及序列测定,获得了人肿瘤血管抑制肽alphastatin基因片段序列.结论 首次体外克隆获得了人肿瘤血管抑制肽alphastatin基因,为肿瘤血管抑制肽alphastatin的基因治疗奠定了基础.
关键词： Alphastatin 血管抑制肽 基因克隆 聚合酶链反应 -
肿瘤血管抑制肽alphastatin重组腺伴随病毒的制备
目的 构建并产生肿瘤血管抑制肽alphastatin(Al)重组腺伴随病毒(rAAV)载体.方法 将目的基因alphastatin插入载体质粒pSSHG-巨细胞病毒(CMV)的EcoR I和BamH I位点,构建重组质粒pSSHG-CMV/NT4-Al.用腺病毒辅助质粒pFG140代替野生型腺病毒,包装质粒pAAV/Ad及已构建的重组腺伴随病毒载体质粒,使用三质粒共转染法转染293细胞,包装得到腺伴随病毒(AAV)-Al.采用氯仿抽提、聚乙二醇沉淀回收纯化,斑点杂交方法测定重组病毒滴度.结果 重组病毒rAAV-Al滴度约为2×1012颗粒/ml.结论 成功制备了重组病毒rAAV-Al,提供了一种生产足量安全的rAAV-Al简单易行的方法,为肿瘤的基因治疗实验奠定了基础.
关键词： Alphastatin 腺伴随病毒 斑点杂交
